高中生物中蛋白质和多肽的区别?
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 02:28:15
高中生物中蛋白质和多肽的区别?
高中生物中蛋白质和多肽的区别?
高中生物中蛋白质和多肽的区别?
有无空间结构是蛋白质和多肽的主要区别,多肽具有了空间结构就成为蛋白质了;蛋白质可以含有一条或几条多肽链.
蛋白质由多肽组成
氨基酸之间可以通过肽键相连,两个氨基酸相连为二肽,依此类推还有三肽、四肽……如果相连的氨基酸少于十个则被称为寡肽(小分子肽),超过十个就是多肽了,而超过五十个就被称为蛋白质了。
多肽是人体自身存在而且必需的活性物质,是人体的重要组成物质、营养物质,它广泛分布于人体各处,特别是大脑里,对几乎所有的细胞都有调节作用。人体缺失了多肽,免疫系统、各功能系统就会发生紊乱,就会出现各种慢性病。
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氨基酸之间可以通过肽键相连,两个氨基酸相连为二肽,依此类推还有三肽、四肽……如果相连的氨基酸少于十个则被称为寡肽(小分子肽),超过十个就是多肽了,而超过五十个就被称为蛋白质了。
多肽是人体自身存在而且必需的活性物质,是人体的重要组成物质、营养物质,它广泛分布于人体各处,特别是大脑里,对几乎所有的细胞都有调节作用。人体缺失了多肽,免疫系统、各功能系统就会发生紊乱,就会出现各种慢性病。
多肽的保存
多肽在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中,在将它们暴露于空气之前, 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时,最好的方法是以小的工作样量存放。
对于含Cys, Met orTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其溶解必不可少,因为这种多肽可易空气氧化, 在封瓶前,慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比,生命期有限。
多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外,这点都会发生, 在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用声处理。溶解仍有问题, 加少量稀乙酸(10%)或氨水,会便于溶解。
要长期保存多肽, 最好冷冻干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。 多肽易受细菌降解,应用无菌纯化水溶解。
含有Met, Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化,寿命有限。应溶于无氧溶剂, 为防止重复冻融的破坏, 建议溶解过量的肽的便实验,其余多肽以固体形成保存。
多肽的溶解性
大多数肽的首选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽, 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle来溶解,这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。
残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。
多肽合成
多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,合成一般从C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的。现在多采用固相 合成法从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生,合 成柱和添加的氨基酸的侧链都是被保护的。羧基端是游离的,并且在反应之 前必须活化。化学合成方法有两种,即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很 多优势,现在大多采用Fmoc法合成。
具体合成由下列几个循环组成:
一、去保护:Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂(piperidine)去 除氨基的保护基团。
二、激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种激活剂所激活。激活的单体 与游离的氨基反应交联,形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反 应完成。循环:这两步反应反复循环直到合成完成。 洗脱和脱保护:多肽从柱上洗脱下来,其保护基团被一种脱保护剂(TFAl) 洗脱和脱保护。
HPLC分析和纯化
分析HPLC使用柱子和泵系统,可以经受传递高压,这样可以用极细的微粒(3-10μ m)做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。
HPLC分两类:离子交换和反相。 离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体,而多肽或多肽混合物,由其氨基酸组成表现出相反电荷。 分离是一种电荷相互作用,通过可变PH, 离子强度, 或两者洗脱出多肽,通常, 先用低离子强度的溶液,以后逐渐加强或一步一步加强,直到多肽火柱中洗脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性PH中带正电来分离。
反相HPLC条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上,用降低离子强度洗脱, 如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成,这种链长度为G4-G8碳原子。 由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的, 高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。 然而,总体实践中, 这两类柱互变无多少显著差别,别类载体由碳水化合物构成, 比如苯基。
典型的操作常由两绶冲剂组成,0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用径向填柱,那么大小是8×100(3-10μ m)和25×250mm(10μ m)
大量各种缓冲剂含许多不同试剂,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸, 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸钠/氨,TFA/TEA,磷酸钠或钾,异戊酚。这样许多不同组合可形成缓冲剂,但要注意一点:硅反相柱料不能长时间暴露于高pH,甚至微碱pH, 因为这样会破坏柱子。
不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%, 而肽含量相关带电基团(如Arg, Lys )的抗离子量和肽亲水性决定。这是合成肽的本身特性。
收起
蛋白质由多肽组成,具有空间结构,蛋白质可以含有一条或几条多肽链。但有些蛋白质仅是简单的多肽。
蛋白质是具有一定空间结构的多肽链.如果说多肽是一根红线的话,蛋白质就是用这一根或几根红线结成的中国结.
多肽没有空间结构