pcr退火温度高特异性强,为什么?..低 非特异多 为什么?RT
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/19 18:43:04
pcr退火温度高特异性强,为什么?..低 非特异多 为什么?RT
pcr退火温度高特异性强,为什么?..低 非特异多 为什么?
RT
pcr退火温度高特异性强,为什么?..低 非特异多 为什么?RT
DNA的双链主要是靠氢键联系在一起.
退火温度越高,断开氢键的热能越大,引物与模板越不易结合,反之,退火温度越低,越容易形成氢键,进行退火.
所以当温度高时,只有碱基匹配程度高的,也就是模板与引物形成配对数越多的引物,才能结合到模板上,这样扩增出来的条带最少,甚至只有一条,也就是引物和目的序列的完美匹配,因此特异性越高.
反之,若退火温度低,引物和模板匹配低时,也能稳定存在,那么模板上可能存在很多区域能和引物上的少量碱基匹配,进行引发,因此dna条带会很多,非特异带增加.
特异带是指你的目的带.非特异带是pcr中扩增出的非目的带.
温度高的时候引物序列需要和你的模板同源性很高才能保证能结合上去，，但是如果只是部分碱基相同的话温度高的时候就不容易集合成稳定的结构，，而温度低了以后，，只要有部分碱基序列匹配就能够集合到模板上并进行扩增，，从而会导致大量的非特异性扩增，，其实最关键的就是，温度高，要求引物和模板结合的特异性要高，不高的不能稳定结合从而扩增，。= =不知道说清楚没，，...
全部展开
温度高的时候引物序列需要和你的模板同源性很高才能保证能结合上去，，但是如果只是部分碱基相同的话温度高的时候就不容易集合成稳定的结构，，而温度低了以后，，只要有部分碱基序列匹配就能够集合到模板上并进行扩增，，从而会导致大量的非特异性扩增，，其实最关键的就是，温度高，要求引物和模板结合的特异性要高，不高的不能稳定结合从而扩增，。= =不知道说清楚没，，
收起
退火是指温度下降，单链DNA与引物结合的过程。温度过低，可造成引物与模板之间只需有一小段可以互补配对就能配对，造成非特异性产物增加。而温度高时，需要引物与模版之间有较长的互补配对序列才能相互配对，特异性增强。