ISSR-PCR的退火温度怎么设计?

ISSR-PCR的退火温度怎么设计? ISSR-PCR引物的退火温度问题我做ISSR-PCR引物的退火温度能不能直接使用primer5.0这个软件计算得出的退火温度.理论上来说这是最佳的退火温度吗? PCR的退火温度怎么设定 PCR的退火温度怎么选择 pcr退火温度是根据什么原则设计的 pcr退火温度怎么确定? pcr退火温度怎么确定 在做RT-PCR时,或者是一般的PCR时,退火温度怎么设置,退火温度和Tm值之间有怎么样的关系? DNA检测时,pcr扩增的退火温度怎么确定?有几种方法,请详述之 PCR退火温度不稳定是什么原因? PCR退火温度不稳定是什么原因? 用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度Tm,看哪个? ISSR－PCR退火温度如何设定有些引物说明书上的Tm值只有30～40度,通过公式2（A＋T）＋4（G＋C）－2计算的温度也只有30多度,我该如何设定退火温度? PCR反应退火温度的高低与什么因素有关 如何利用梯度PCR测定退火温度?怎样测定的? 退火温度递减的PCR程序叫什么比如PCR退火温度是55 然后每个循环退火温度降低1度 做ISSR 的PCR条件优化我想根据这几个做个正交试验 模板浓度,dNTP,引物浓度,taq酶,Mg离子浓度是不是太多了……?退火温度我用梯度PCR基本弄好了,总体积25μl,模板1μl,引物1μl,其它用的是mix跑的, 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度!文献上62摄氏度,我感觉有点不对劲啊!给出PCR退火温度的计算的方法！谢谢··