请教Western blotting!我要做WB检测凋亡蛋白bcl-2、fas、p53表达,请问能否在一张膜上加一抗时把三种蛋白的一抗都一起加?另外,做完SDS-PAGE电泳后用考马斯亮蓝染色检测电泳情况后的凝胶能否继续
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 06:41:27
请教Western blotting!我要做WB检测凋亡蛋白bcl-2、fas、p53表达,请问能否在一张膜上加一抗时把三种蛋白的一抗都一起加?另外,做完SDS-PAGE电泳后用考马斯亮蓝染色检测电泳情况后的凝胶能否继续
请教Western blotting!
我要做WB检测凋亡蛋白bcl-2、fas、p53表达,请问能否在一张膜上加一抗时把三种蛋白的一抗都一起加?另外,做完SDS-PAGE电泳后用考马斯亮蓝染色检测电泳情况后的凝胶能否继续做WB?做之前是否要进行相关处理?问题有点多,
请教Western blotting!我要做WB检测凋亡蛋白bcl-2、fas、p53表达,请问能否在一张膜上加一抗时把三种蛋白的一抗都一起加?另外,做完SDS-PAGE电泳后用考马斯亮蓝染色检测电泳情况后的凝胶能否继续
楼主赶着出结果吗?三步并作两步,两步毁成一步……
个人强烈不建议三种ist antibody加在一起,因为这样做,三种抗体的nonspecific bands会重叠,遮盖需要分辨的蛋白.除非,你能确定这三种抗体的基质特异性非常高,否则,洗出来的照片就是一团黑.
如果,你真得很着急,推荐下面这个办法.如果你能确定这三种蛋白的大小相差很多,比如说A=250k B=120k C=75k.那么你就可以把VDPF Membrane切成三段,分别进行1st immunoblot,同样省时而且结果更干净.唯一需要注意的是,这样做的结果好像是不可以公开发表的（至少在我们这里是这样）,因为blot的条件不同,如果你只想测试蛋白性质,那么完全没关系.
第二个问题,因为我本身没做过CBB染色,不敢妄言.在实验室里问了一小圈,不管是东洋鬼子还是西洋鬼子都告诉我如果洗净（具体方法我没问）足够的话不排除可能可以.但大家都说比较adventurous,劝楼主慎重.
第一个问题的答案是no。
第二个问题的答案还是no。这个问题比较容易解决啊，同样的样品跑两张胶就完了，一张转膜一张染色，样品少的话一张胶一半用来转另一半染色。我最近做了不少，都是这么做的。反正配胶的时间就那么多，两张也不会用更多时间。没有必要染色完了再转膜。...
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第一个问题的答案是no。
第二个问题的答案还是no。这个问题比较容易解决啊，同样的样品跑两张胶就完了，一张转膜一张染色，样品少的话一张胶一半用来转另一半染色。我最近做了不少，都是这么做的。反正配胶的时间就那么多，两张也不会用更多时间。没有必要染色完了再转膜。
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