在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长但是在进一步做PCR验证时(扩增目的基因),却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/28 13:12:58
在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长但是在进一步做PCR验证时(扩增目的基因),却又发现在相应大小750bp处没有条

在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长但是在进一步做PCR验证时(扩增目的基因),却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物
在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长
但是在进一步做PCR验证时(扩增目的基因),却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物二聚体,这是为什么?应该可以排除PCR设定条件的问题,因为跟我同组的人都P出来了,就我没有目的条带.

在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长但是在进一步做PCR验证时(扩增目的基因),却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物
你确定是Kan抗性吗?如果你的确实是kan的话,平板克隆假阳性的情况很常见.关键PCR设好阳性对照,如果阳性对照有目的条带,而挑的克隆没有,就能说明是假阳性克隆.另外,可以多挑几个克隆,我一般都会挑10-20个.

印象中,PET系列的质粒一般都转化BL21细胞吧?还要看你的pet质粒是那个系列的,有的是amp抗性,有的是kana抗性,不定都是kana 的抗性。