无菌操作中、应该注意哪些事项?严格的无菌操作、要注意哪些事项?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/22 23:44:27
无菌操作中、应该注意哪些事项?严格的无菌操作、要注意哪些事项?
无菌操作中、应该注意哪些事项?
严格的无菌操作、要注意哪些事项?
无菌操作中、应该注意哪些事项?严格的无菌操作、要注意哪些事项?
无菌操作技术及注意事项
1、玻璃器皿的消毒和清洁
⑴新购玻璃器皿的处理新购玻璃器皿应用热肥皂水洗刷,流水冲洗,再用1%～2%盐酸溶液浸泡,以除去游离碱,再用水冲洗.对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等,经清水洗净后应注入浓盐酸少许,慢慢转动,使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸,再用水冲洗.
⑵污染玻璃器皿的处理
①一般试管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%石炭酸浸泡,再煮沸30分钟,或在3%～5%漂白粉澄清液内4小时,有的亦可用肥皂或合成洗涤剂洗刷使尽量产生泡沫,然后用清水冲洗至无肥皂为止.最后用少量蒸馏水冲洗.
②细菌培养用的试管和培养皿可先行集中,用1kg/cm2高压灭菌15～30分钟,再用热水洗涤后,用肥皂洗刷,流水冲洗.
③吸管使用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时,逐支用流水反复冲洗,再用蒸馏水冲洗.
④油蜡沾污的器皿,应单独灭菌洗涤,先将沾有油污的物质弃去,倒置于吸水纸上,100℃烘干半小时,再用碱水煮沸,肥皂洗涤,流水冲洗.必要时可用二甲苯或汽油去油污.
⑤染料沾污的器皿,可先用水冲洗,后用清洁或稀盐酸洗脱染料,再用清水冲洗.一般染色剂呈碱性,所以不宜用肥皂的碱水洗涤.
⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡,取出后流水冲洗,再用肥皂或弱碱性煮沸,自然冷却后,流水冲洗.被结核杆菌污染或不易洗净的玻片,可置于清洁液内浸泡后再冲洗.
2、无菌器材和液体的准备将玻璃器具中的培养皿、培养瓶、试管、吸管等按上述方法洗净烘干后,用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花,装入干净的铝盒或铁盒中,于120℃的干燥箱中干燥灭菌2小时,取出备用.对于手术器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液,则采用高压蒸气灭菌法,即在15磅的条件下,加热20分钟.而对于MEM培养液、小牛血清和消化液等需用G5或G6滤器负压抽滤后使用.
3、无菌操作过程在无菌操作过程中,最重要的是要保持工作区的无菌、清洁.因此,在操作前 20～30分钟要先启动超净台和紫外灯,并认真洗手和消毒.在操作时,严禁喧哗,严禁用手直接拿无菌物品,如瓶塞等,而必须用消毒的止血钳、镊子等.培养瓶应在超净台内操作,并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧.对于吸管应先用手拿后1/3处,戴上胶皮乳头,并用酒精灯烧烤之后再吸液体.
4、常用清洁液的配制法⑴重铬酸钾清洁液：可根据不同需要,选用下列的任何一种浓度.先将重铬酸钾溶于水中,再慢慢加入浓硫酸.注意,此时可产生高热,应防止容器破裂.重铬酸钾清洁液除污力强,腐蚀性大,应避免接触皮肤和衣服.为防止吸收空气的水分而变质,此液应贮存于带盖的容器中.如清洁效力较差,可再加入少量重铬酸钾及浓硫酸,还可继续使用.直到液体变蓝绿色,即不能再用.配制重铬酸钾清洁液时,宜用耐高温的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器.使用玻璃器皿时,应特别注意防止产生高热而破裂,切忌用量筒来配制.
⑵磷酸三钠将其配成5%～10%水溶液,可用于洗涤玻璃器皿上的油污,但经常使用腐蚀玻璃,使器皿表面模糊、毛糙.
⑶硝酸清洁液将其配成50%水溶液,可用于清洁微量滴定筒.⑷乙二胺四乙酸二钠（EDTA钠盐）将其配成5%～10%水溶液,可洗脱粘附于玻璃器皿内壁的白色沉淀物.⑸尿素溶液尿素是溶解蛋白质的良好溶剂,适用于洗涤粘附有血液血清等蛋白质的吸管、试管等.