培养基的制作及无菌操作技术常见的注意事项
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/24 08:27:07
培养基的制作及无菌操作技术常见的注意事项
培养基的制作及无菌操作技术常见的注意事项
培养基的制作及无菌操作技术常见的注意事项
培养基的制作注意事项：
1 注意营养物质的浓度比和C/N比
2 控制pH条件
3 原料来源的选择
4 灭菌处理
无菌操作注意事项：
1.实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 %
ethanol 擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作.每
次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间
污染.实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面.操作间
隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作.
2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可
以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通.实验用品以70 % ethanol 擦
拭后才带入无菌操作台内.实验操作应在抬面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操
作.
3.小心取用无菌之实验物品,避免造成污染.勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打
开之容器正上方操作实验.容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45° 角取用,
尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面.
4.工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验.对于来自人类或是病毒
感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II).
中,应避免引起aerosol 之产生,小心毒性药品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐
针头之伤害等.
5.定期检测下列项目：
5.1.CO2 钢瓶之CO2 压力
5.2.CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换).
5.3.无菌操作台内之airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300
小时/预滤网,3000 小时/HEPA).
6.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750),定期更换水槽的水