蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀啊?

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/22 04:56:48

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蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀啊?
蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀啊?

蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀啊?
蛋白浓度过高的时候,会发生聚集而沉淀.有些不易溶蛋白随着镍柱的富集作用就会沉淀.
由于不知道你实验目的,简单认为你要纯化表达的蛋白,解决方法：
1. 换更强亲水肽段载体pet50（从酶切链接开始做）,但是这样会在表达出来蛋白中增加非目的蛋白成分
2. 不要用最佳浓度咪唑洗脱,用稍差一些的,这样洗脱出来蛋白速度慢,浓度低,但是看你是否对浓度要求了.
3. 重新设计引物把输水片段删掉,这样增加可溶性再表达纯化
4. 考虑在沉淀里加入稀盐,促溶.但不知对你实验是否有影响

如果你电泳检测确认沉淀是蛋白的话，这个现象我以前还真没有遇到过。
说的太笼统，我也只能笼统的说…………
首先，全程注意蛋白质的浓度，不能太高。
其次，洗脱体系和样品有无重大的不同（比如样品中有尿素而洗脱体系中没有）
最后，纯化的时间和环境温度，是否会引起蛋白质变性。
从这几个方面看看吧。...

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如果你电泳检测确认沉淀是蛋白的话，这个现象我以前还真没有遇到过。
说的太笼统，我也只能笼统的说…………
首先，全程注意蛋白质的浓度，不能太高。
其次，洗脱体系和样品有无重大的不同（比如样品中有尿素而洗脱体系中没有）
最后，纯化的时间和环境温度，是否会引起蛋白质变性。
从这几个方面看看吧。

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