维生素A的实验室提取方法是什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/28 20:11:34
维生素A的实验室提取方法是什么?
维生素A的实验室提取方法是什么?
维生素A的实验室提取方法是什么?
2.实验内容：
本实验主要通过提取鲜猪油的维生素A,以及测量其含量,了解维生素A.
测量食品中维生素A的含量,从而为人们的日常保健起指导作用,关注健康生活.
3.实验原理：
维生素a属于脂溶性维生素,故可用脂类溶剂如乙醚、氯仿等从组织细胞中提取维生素A.维生素A与三氯化锑的氯仿溶液反应生成一种蓝绿色的化合物,所成颜色的深浅与维生素A的量之间有线性关系,因此可用比色法测定维生素A的量.
4.实验器材：
1）容量瓶（200ml,100ml,50ml） 2)吸量管（10ml,5ml,2ml,1ml）
3)试管及试管架 4）研钵 5）带塞三角架（100ml）
6)恒温水浴 7）分光光度计
5.试剂：
乙醚,氯仿,无水硫酸钠,醋酸酐,20%的三氯化锑氯仿溶液,维生素A醋酸酯,
鲜肝油.
6.实验步骤:
1.维生素A标准曲线的制备
1）维生素A储存液（50I.U./ml）
取鱼肝油胶丸一粒（10000I.U./粒）,溶于氯仿并用氯仿稀释到200ml.
2）去六只试管,如下：
1 2 3 4 5 6
维生素A的储存液
（50I.U./ml）ml 0.625 1.25 2.5 3 4 5
氯仿/ml 4.375 3.75 2.5 2 1 0
维生素A浓液I.U./ml 6.25 12.5 25 30 40 50
3)另取7只试管,分别标0,1’,2’,3’,4’,5’,6’.向0号试管内加入1ml氯仿溶液,取上表配置的不同浓度的维生素A液各1ml,分别加入1’,2’,3’,4’,5’,6’号中.
4）向7只试管内分别加入1ml醋酸酐溶液,混合内容物；再分别加入2ml三氯化锑氯仿溶液,混合.
5） 以0号管为对照,测定其他各管的O.D620,各管中的维生素a的量为横坐标,以O.D620值为纵坐标,绘制维生素a的标准工作曲线.
2.待测样品中的维生素A的提取及含量测定
1)精确称取新鲜的猪肝样品2~5g,剪碎放入研钵内,加入约15g的无水硫酸钠,研磨至样品的水完全被吸收为止.
2）将研磨物转入一个100ml的三角瓶中（三角瓶应用黑纸裹住）,加入50ml乙醚,盖上盖子,震摇抽取10min.
3）将三角瓶放入冰浴或4度冰箱静置约30min,使乙醚层澄清.
4)取两只试管,表为1和2,向每只试管加入5ml维生素A提取液,把试管放于70~80度的水浴中将乙醚挥发蒸干,立即加入1ml氯仿,1ml醋酸酐溶液,再加入2ml三氯化锑溶液,混合后以上面的0号为对照测定两只试管的O.D620.
5）计算猪肝肝样品中维生素A的百分含量.
实验结果：
维生素A标准曲线表：
1 2 3 4 5 6
维生素A储存液 0.625 1.250 2.500 3.000 4.000 5.000
氯仿 4.375 3.750 2.500 2.000 1.000 0
维生素A浓液 6.250 12.500 25.000 30.000 40.000 50.000
三氯化锑氯仿溶液：三氯化锑2.0118g,稀释到20ml
维生素A提取液：取3.31g猪肝研磨,15.0g无水硫酸钠,50ml乙醚