克隆到一个基因,该基因和癌症有关系,如何设计实验证明它是原癌基因还是抑癌基因?
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/24 07:30:51
克隆到一个基因,该基因和癌症有关系,如何设计实验证明它是原癌基因还是抑癌基因?
克隆到一个基因,该基因和癌症有关系,如何设计实验证明它是原癌基因还是抑癌基因?
克隆到一个基因,该基因和癌症有关系,如何设计实验证明它是原癌基因还是抑癌基因?
构建表达载体,让他表达
大致有这样的一个模式,你可以根据你的具体情况来选择。
1.回答这个基因是否与癌症的病理等级/分型、临床分期、临床预后等参数有关?
a. 如果已有该基因产物的抗体:
i. 病理切片-->免疫组化-->免疫评分-->统计分析
ii. 新鲜临床标本-->Western blot-->结果分析
b. 如果没有相应抗体: 收集临床新鲜肿瘤组织...
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大致有这样的一个模式,你可以根据你的具体情况来选择。
1.回答这个基因是否与癌症的病理等级/分型、临床分期、临床预后等参数有关?
a. 如果已有该基因产物的抗体:
i. 病理切片-->免疫组化-->免疫评分-->统计分析
ii. 新鲜临床标本-->Western blot-->结果分析
b. 如果没有相应抗体: 收集临床新鲜肿瘤组织标本-->RT-PCR-->结果分析
回答了第一个问题,就可以大致推断该基因可能是癌基因或者抑癌基因。当然做到这一步还远不能证实你的问题。如果你是硕士的话,做到这一步是可以接受的。如果是博士的话,你就需要继续回答下面的问题。
2. 该基因对某癌症的肿瘤生物学有如何影响?
对该基因进行上调或者下调,然后观察下面的现象
体外实验 (多选):
a. 该基因如何影响了肿瘤细胞的生长/存活/增殖?细胞生长曲线/MTT、WST-1 /BrdU掺入实验 等等
b. 该基因如何影响了肿瘤细胞的细胞周期?细胞周期分析
c. 该基因如何影响了肿瘤细胞的凋亡?凋亡分析(TUNEL法、Annixin V/PI双染法)
d. 该基因如何影响了肿瘤细胞的迁移? 如:细胞划痕实验
e. 该基因如何影响了肿瘤细胞的侵袭转移? 如:Transwell 实验
体内实验:
裸鼠体内成瘤实验!
观察肿瘤生长速度(体积、肿瘤);血管密度
其他,如:肿瘤细胞增殖、凋亡等
回答了第二个问题,可以基本了解该基因影响了肿瘤生物学的哪个方面。
基本上可以够博士毕业。
但是如果你要求比较高,还可以考虑回答第三个问题。
3. 该基因通过何种机制来影响肿瘤生物学的某个方面。
这个问题需要根据你第二个问题的结果具体来看。就不详说了。
以上只是我个人的一些建议,希望能使你有个大致的轮廓印象。
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