在高效液相色谱中梯度洗脱装置的作用是什么
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/23 18:30:39
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梯度洗脱装置分两种:
高压梯度:用两台高压输液泵将两种溶剂输入
低压梯度:在常压下将两种溶剂(或多元溶剂)混合,然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中.
梯度洗脱可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度.
但在使用中,梯度洗脱也有许多与等度洗脱不同的地方需要注意.
梯度洗脱时应注意:
1、注意各溶剂间的互溶性.
2、对溶剂的纯度要求更高(影响重现性).
3、注意梯度变化时系统压力的变化,防止超出限度.
4、梯度结束后,用初始流动相冲洗,使柱子平衡一段时间(再生),使系统回复到初始状态.(梯度周期)
5、低压梯度要注意脱气,混合后容易产生气泡.
6、容易出现鬼峰,应作空白试验.
7、梯度选择时尽量几相之间相变化要小,否则不易平衡.
8、梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器(如紫外吸收检测器或荧光检测器),而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器(如示差折光检测器).
9、要注意水相中盐的浓度,防止在有机相提升过程中盐的析出.
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