在做PCR时,出现引物二聚体做PCR的时候 用的水作对照,不管是样品还是对照组都出现了引物二聚体,而且别的组的同学就没有此现象 说明引物设计上和PCR反应条件上没有问题 那么问题出在哪里

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 20:45:18
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在做PCR时,出现引物二聚体做PCR的时候 用的水作对照,不管是样品还是对照组都出现了引物二聚体,而且别的组的同学就没有此现象 说明引物设计上和PCR反应条件上没有问题 那么问题出在哪里
在做PCR时,出现引物二聚体
做PCR的时候 用的水作对照,不管是样品还是对照组都出现了引物二聚体,而且别的组的同学就没有此现象 说明引物设计上和PCR反应条件上没有问题 那么问题出在哪里呢?

在做PCR时,出现引物二聚体做PCR的时候 用的水作对照,不管是样品还是对照组都出现了引物二聚体,而且别的组的同学就没有此现象 说明引物设计上和PCR反应条件上没有问题 那么问题出在哪里
一.引物设计和样品使用均是一样的情况,就是反应条件的问题
二.反应条件就看你的实验操作和所使用的仪器,操作都一样的话,仪器设定上出问题的可能性会大一些,其中退货温度是比较关键的
三.人品问题也会导致这样的情况
四.一般减少引物二聚体的方法：
1.从引物自身着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法；
2.可能模板有问题；
3.模板浓度过小,适当加大模板量；
4.Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高,可降低它们的浓度；
5.取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的；
6.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO,可以增强特异性；
7.PCR反应体系的配制在冰上进行,最后加TAq酶,PCR结束后,产物勿放置在室温下过长时间,有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体；
8.增加循环数；
9.降低退火温度后有条带,则应逐渐提高温度,若提高温度的同时产物量减少,则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定,片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；
10.若降低退火温度,发现还是只有引物二聚体,而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别,则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀,导致吸取的试剂浓度不对；
11.以上次的PCR产物作模板二次PCR,可以提高引物与模板的特异性,减少引物二聚体,如果两次时间间隔短的话,可以把原产物稀释100－1000倍,如果间隔较长可以稀释50－100倍.

那看你是做什么实验了，基本上出现引物二聚体没什么问题的，不影响实验结果的

别的组的同学用的引物跟你的引物是一样的吗？如果一样的话，那就要考虑您的模板质量的问题了。如果扩增不成功，电泳图的底部都会有引物的条带。

在做PCR时,出现引物二聚体做PCR的时候 用的水作对照,不管是样品还是对照组都出现了引物二聚体,而且别的组的同学就没有此现象 说明引物设计上和PCR反应条件上没有问题 那么问题出在哪里 做PCR时,怎么设计引物? PCR之后电泳没有条带,连引物二聚体都没有?这是怎么回事了?PCR一直都没出现过引物二聚体,引物二聚体是在溴芬兰的前面么? 做PCR时引物过量会产生什么样的条带 pcr如果只有引物二聚体时应该怎样调整 我做转基因植物,最近一直做PCR鉴定,但只有引物二聚体,原因会有哪些?转同样的基因,在转基因烟草的PCR鉴定时,能P出目的条带,而且我用的是相同的条件来做我的却得不到结果.会不会和物种有 用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同是用这两个模板做pcr，在设计引物时，设计引物所用的序列有区别么 人体内DNA复制需要引物吗?在做PCR时,需要添加相应的引物,那么DNA人体内复制需要引物吗? 关于转基因植株检测的问题我做的是大豆转基因，最近做检测，用328bp的引物做PCR时质粒很正常，可是基因组在328bp左右没有出现条带，而在700bp出现很亮的条带；用35S引物PCR，在目的条带那 减少PCR产物中引物二聚体的方法? pcr 扩增产生大量引物二聚体的原因 PCR中产生的引物二聚体大概是多少bp? PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul （浓度100ng）引物上下游各1u RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul （浓度100ng）引物上下游各1u PCR引物二聚体太亮怎么办 做RT-PCR设计引物时,找引物序列有哪些好方法? 微卫星PCR有关模板、引物、反应条件用微卫星检测种群多样性时,pcr反应中的模板是所有个体的混合吗,还是,一个个体模板加所有的微卫星引物?因为很多对微卫星引物,那么在做pcr时,多对引物