氮蓝四唑NBT法测超氧化物歧化酶基本原理和步骤
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/16 20:31:52
氮蓝四唑NBT法测超氧化物歧化酶基本原理和步骤
氮蓝四唑NBT法测超氧化物歧化酶基本原理和步骤
氮蓝四唑NBT法测超氧化物歧化酶基本原理和步骤
一、酶液制备
称取5.0g果肉,加入5.0ml经4℃预冷的0.1M 、pH=7.5提取缓冲液,在冰浴研磨成匀浆.于4℃,10,000×g离心30min,收集上清液,用于SOD活性测定.
二、测定所需溶液的配制：
1、0.1mol/l、pH7.8磷酸钠缓冲液
2、提取缓冲液0.1M 、pH=7.5磷酸缓冲液
称取77mg二硫苏糖醇（DTT）,5g PVP,用0.1 mol/l pH7.5磷酸钠缓冲液溶解,定容至100ml,即得取缓冲液 ,低温（4℃）贮藏备用.
3、50 mmol/l、pH 7.8磷酸钠缓冲液
4、130 mmol/l L-蛋氨酸（MET）溶液
称取1.94g L-蛋氨酸,用50 mmol/l、pH 7.8磷酸钠缓冲液溶解,定容至100ml,摇匀.现用现配.
5、750μmol/l氮蓝四唑（NBT）溶液
称取61.3mg NBT ,用蒸馏水溶解,定容至100ml ,充分混匀（现用现配）
6、100μmol/l EDTA-Na2 溶液
称取37.2mg EDTA-Na2,用蒸馏水溶解,定容至100ml,使用时稀释100倍.低温避光保存可用8-10天.
7、20μmol/l 核黄素溶液
称取75.3mg核黄素,用蒸馏水溶解,定容至100ml,使用时稀释100倍.低温避光保存,用黑色瓶装.现用现配.
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试剂（酶）\x05 用量（ml）\x05 终浓度（比色时）
50mM 磷酸缓冲液\x05 1.5\x05
130mM 甲硫氨酸（MET）溶液\x05 0.3\x05 13 mM
750µM 氮蓝四唑（NBT）\x05 0.3\x05 75µM
100µM EDTA\x05 0.3\x05 10µM
20µM 核黄素\x05 0.3\x05 2.0µM
酶液 \x05 0.05\x05 对照2支管以缓冲液代替
蒸馏水\x05 0.25\x05
总体积\x05 3.0\x05
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SOD活性=
ODc：照光对照管反应混合液的吸光度值
ODs：样品管反应混合液的吸光度值
V：样品提取液总体积
Vs：测定时所取样品提取液体积
t：光照反应时间
m：样品质量
（希望能帮到你）