电泳胶板怎么做

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/24 14:30:48

电泳胶板怎么做电泳胶板怎么做电泳胶板怎么做根据分离要求确定是琼脂糖还是聚丙烯酰胺,根据分离分子的分子量确定浓度；加水加热融化,装好梳齿,合适温度加入显色剂（或者跑完电泳染色）,倒胶板.以下为琼脂糖凝胶

电泳胶板怎么做
电泳胶板怎么做

电泳胶板怎么做
根据分离要求确定是琼脂糖还是聚丙烯酰胺,根据分离分子的分子量确定浓度；
加水加热融化,装好梳齿,合适温度加入显色剂（或者跑完电泳染色）,倒胶板.
以下为琼脂糖凝胶电泳的操作：
1 选择合适的水平式电泳槽,调节电泳槽平面至水平.检查稳压电源与正负极的线路；
2 选择孔径大小合适的点样梳子,垂直架在电泳胶模的一端,使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm；
3 按待分离DNA,配制相应浓度琼脂糖,100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀；
4 用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好,防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透.待琼脂糖凝胶冷却至50℃左右时,加入6μl核酸染料,摇匀,轻轻倒入电泳胶模中,琼脂糖凝胶的厚度在3～5mm.倒胶时要避免产生气泡,若有气泡可用吸管小心吸去；
5 琼脂糖凝胶凝固后,在室温放置20min,小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板,保持点样孔的完好；
6 将电泳胶模放入电泳槽中,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1～2mm.如点样孔内有气泡,用吸管小心吸出,以免影响加样；
7 将10μl DNA样品与2μl体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合.上样缓冲液不仅可以提高样品的密度,使样品均匀沉到样品孔内,还可以使样品带颜色,便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置；
8 用微量移液器将样品小心加入加样孔内,记录样品点样秩序；
9 盖上电泳槽,开启电源开关,最高电压不超过5V/cm（100～150V恒压电泳）,使DNA从负极向正极移动；
10 电泳时间随实验的具体要求而异.电泳一般需1～3小时.电泳完毕后关闭电源,戴一次性塑料手套取出凝胶,尽可能将所有的电泳缓冲液淋干,在254nm波长的透射紫外灯下观察.

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