请教实时荧光定量PCR高手,我想做两个物种的鼠的同一基因的相对定量并比较,请问引物设计应该注意什么因为这两个老鼠的目标基因CDS区序列不是完全相同,想要根据CDS区设计引物 需要注意什
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 05:04:35
请教实时荧光定量PCR高手,我想做两个物种的鼠的同一基因的相对定量并比较,请问引物设计应该注意什么因为这两个老鼠的目标基因CDS区序列不是完全相同,想要根据CDS区设计引物 需要注意什
请教实时荧光定量PCR高手,我想做两个物种的鼠的同一基因的相对定量并比较,请问引物设计应该注意什么
因为这两个老鼠的目标基因CDS区序列不是完全相同,想要根据CDS区设计引物 需要注意什么?比如 1 可以在他们一样的序列处设计引物吗?扩增的序列长度要一样吗?2 内参基因可不可以用同一个引物 就是扩增同样长度的序列?还有这两引物要扩增跟内参一样的长度吗?新手 请不吝赐教
请教实时荧光定量PCR高手,我想做两个物种的鼠的同一基因的相对定量并比较,请问引物设计应该注意什么因为这两个老鼠的目标基因CDS区序列不是完全相同,想要根据CDS区设计引物 需要注意什
建议你还是选择CDS区不一样的地方设计引物吧,这样可以避免交叉污染引起的非特异扩增,扩增的序列长度不一定要一样,每个引物你最好设计两三对,然后做一个相对定量看看不同引物的扩增效率,选择比较好的两对引物做后续试验,内参基因的引物不需要跟目的基因的扩增产物一样长,这样你设计引物的时候很受限制,总体产物长度在80-150bp之间都是可以接受的,主要是做相对定量的时候不同引物之间的扩则效率要比较接近,这样才有可比性.
不需要和内参一样，产物也不需要都一样。关键是引物，引物GC含量不要太高，不要有引物二聚体，交叉二聚体，再就是目的片段不要太长，你可以设计好了先做普通PCR看看特异性以及引物二聚体，定量前做个溶解曲线看看，其实没什么，只要引物设计好了就没多大问题...
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不需要和内参一样，产物也不需要都一样。关键是引物，引物GC含量不要太高，不要有引物二聚体，交叉二聚体，再就是目的片段不要太长，你可以设计好了先做普通PCR看看特异性以及引物二聚体，定量前做个溶解曲线看看，其实没什么，只要引物设计好了就没多大问题
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