镍离子亲和柱纯化蛋白的洗脱液和平衡液怎么配?我第一次做蛋白,请尽量说详细点我手上只有一个笔记,是这样写的平衡液:50mM 磷酸钠 300mM氯化钠洗脱液:150mM咪唑具体的洗脱的步骤都有,1.平

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/27 17:36:40
镍离子亲和柱纯化蛋白的洗脱液和平衡液怎么配?我第一次做蛋白,请尽量说详细点我手上只有一个笔记,是这样写的平衡液:50mM磷酸钠300mM氯化钠洗脱液:150mM咪唑具体的洗脱的步骤都有,1.平镍离子亲

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镍离子亲和柱纯化蛋白的洗脱液和平衡液怎么配?
我第一次做蛋白,请尽量说详细点
我手上只有一个笔记,是这样写的
平衡液:50mM 磷酸钠
300mM氯化钠
洗脱液:150mM咪唑
具体的洗脱的步骤都有,
1.平衡液只有这两种成分这么简单吗?
2.洗脱液是水加咪唑还是平衡液加咪唑呢?

镍离子亲和柱纯化蛋白的洗脱液和平衡液怎么配?我第一次做蛋白,请尽量说详细点我手上只有一个笔记,是这样写的平衡液:50mM 磷酸钠 300mM氯化钠洗脱液:150mM咪唑具体的洗脱的步骤都有,1.平
1.平衡液是缓冲液,应该是PB或PBS,这个配方很多手册可以查,注意亲和层析的pH是一个比较重要的参数,会影响洗脱过程的,有一种镍柱洗脱方法就是高pH上样,低pH洗脱.
2.洗脱液一般是平衡Buffer中加入咪唑,没有缓冲的体系有可能造成蛋白的变性.

显然不可能是这样的配方。。。
参考Proteintech group公司的protocol吧:
http://www.ptglab.com/blog/wp-content/uploads/2010/08/Affinity-purification-of-soluble-His-tagged-proteins1.pdf

镍离子亲和柱纯化蛋白的洗脱液和平衡液怎么配?我第一次做蛋白,请尽量说详细点我手上只有一个笔记,是这样写的平衡液:50mM 磷酸钠 300mM氯化钠洗脱液:150mM咪唑具体的洗脱的步骤都有,1.平 镍柱在基因工程中对目标蛋白的分离纯化的洗脱方案 要三种 镍柱纯化包涵体蛋白采用不同pH洗脱的原理是什么啊?有什么注意事项吗 蛋白G纯化为什么在洗脱和平衡的时候分别出现一个波峰最近接到订单,要求proG纯化,在用PH2.5甘氨酸洗脱时出现一个波峰,在洗脱完以后用binding buff 缓冲液平衡柱子的时候又出现了一个波峰,有 pMAL系列表达的蛋白用什么纯化柱纯化最好?pMAL-p2X表达载体表达出的蛋白用哪种树脂纯化呢?用Ni-NTA还是Amylmose亲和柱?EK酶和Factor Xa是酶切什么的? 在纯化蛋白时,镍离子有什么作用?用His柱纯化的 纯化后上柱的流川液,洗涤液和洗脱液是什么意思?他们的英语怎么说 离子分离为什么用不同浓度的洗脱液洗脱 【求助/交流】镍柱纯化时,咪唑洗脱液需要调pH吗 【求助/交流】镍柱纯化时,咪唑洗脱液需要调pH吗 蛋白质纯化洗脱在蛋白质纯化时,用PH2.0的酸性buffer洗脱,为什么不担心蛋白会遇酸沉淀 蛋白过镍柱纯化的原理和步骤是什么 关于液相色谱法纯化蛋白质我想知道凝胶过滤色谱、离子交换色谱、亲和色谱、疏水色谱,这四种色谱相比,它们各自的优缺点,还有各自适合分离纯化什么蛋白?答得好追加分数! 要通过分子筛、离子交换、亲和层析从一稀蛋白混合物中纯化出目的蛋白,上述三种层析的顺序怎么安排合理? 麦清蛋白初步提取的洗脱液是什么 Ni-NTA纯化问题,获得不了纯的目的蛋白!我们用的是导入质粒的大肠杆菌,然后用IPTG诱导,然后将细菌裂解.去掉细菌沉淀,上清过柱,然后用浓度为20mM,40mM,60mM,100mM,150mM,200mM的含有咪唑的洗脱液洗脱 如何利用透析法进行脱盐浓缩蛋白?我利用盐酸胍裂解了融合表达的包涵体蛋白然后亲和纯化,现在想要脱盐处理,不知道如何配置脱盐用的透析液,有什么样的原则, 镍柱纯化时,镍离子被洗脱下来掉到蛋白溶液里对蛋白有影响吗?透析时只有透析掉咪唑为什么不说把镍离子透析镍离子别洗掉了所以才会有镍柱重生,重新挂镍离子上去吧!