转化大肠杆菌超级感受态(购买)已经1年不成功,我实在没办法,只有发帖求助了,望热心有志之士不吝赐教!转化前载体与DNA于16℃连接12h,感受态冰上化冻后立即加入连接产物,冰上放置20-30min,
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 15:33:49
转化大肠杆菌超级感受态(购买)已经1年不成功,我实在没办法,只有发帖求助了,望热心有志之士不吝赐教!转化前载体与DNA于16℃连接12h,感受态冰上化冻后立即加入连接产物,冰上放置20-30min,
转化大肠杆菌超级感受态(购买)已经1年不成功,我实在没办法,只有发帖求助了,望热心有志之士不吝赐教!
转化前载体与DNA于16℃连接12h,感受态冰上化冻后立即加入连接产物,冰上放置20-30min,热激60s,后立即转到冰上静置2min,加1ml LB液体培养基于37℃恒温水浴摇床培养复菌1h(不含amp),离心弃850-900菌液,后涂版
1 LB固体培养基不加amp,10h后没有菌落
2 LB固体培养基加amp,连接产物的不生长(600bp),加载体中对照标准片段(700bp)不生长,(注,以上两种都进行16℃连接转化)直接加载体于感受态的的不生长(直接加入后转化)
但42℃我经过温度计测量没有问题,感受态也换了几批,
哎,此实验耽搁我大半学期时间,至今未果,我这个心情呀
这句说错了“1 LB固体培养基不加amp,10h后没有菌落”
实际是:1 LB固体培养基不加amp,10h后形成致密菌落
转化大肠杆菌超级感受态(购买)已经1年不成功,我实在没办法,只有发帖求助了,望热心有志之士不吝赐教!转化前载体与DNA于16℃连接12h,感受态冰上化冻后立即加入连接产物,冰上放置20-30min,
冰上30分钟 热激90S 加1ml培养基37° 180转摇1h
如果是直接加载体的话不要摇1h 直接涂板
如果还不行 那只能是你的连接有问题 或者载体有问题了 可能抗性基因不表达
⊙﹏⊙b汗
我不会,Sorry..........
祝你早日成功.
从你的描述看来,不是转化过程有问题,而是载体或连接有问题,建议用一个以前能够转化的载体做阳性对照