PCR产物和质粒双酶切后电泳如何判断酶切完成?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/19 10:36:47
PCR产物和质粒双酶切后电泳如何判断酶切完成?
PCR产物和质粒双酶切后电泳如何判断酶切完成?
PCR产物和质粒双酶切后电泳如何判断酶切完成?
你是不是要把双酶切后的质粒与载体连接,而无论是PCR还是载体都无法通过电泳判断是否酶切完全,所以不好进行连接呀?对于PCR产物一般会采取这样的策略,将产物首先连接到T载体上,然后再用设计好的双酶切,电泳回收切下的条带,这样就能确保得到的是完全酶切的产物.载体判断比较麻烦,要看载体本身、多大双酶切为点之间的条带有多大、双切前后的大小是否能通过电泳区别出来,但是双切位点一般都在标记基因里面,所以插入片段的载体会在后期转化可以后区分开,所以也没有太大必要确定他是否完全,只要充分酶切就好了.
这个一般酶切一到两个小时就结束。再去电泳分离，将你要的片段（根据理论大小）切胶回收。
因而你不用去判断是否酶切完成或者完全酶切开了（只要90%或者以上的都切开就行了）。如果你非要百分之百的切开，可能电泳也难以检测。而且意义不大。
如果你想节省内切酶，也可以切过夜。不过如果你的质粒提的质量不高，可能让质粒降解。一般两个小时足够了。PCR产物双酶切会出现几条带啊...
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这个一般酶切一到两个小时就结束。再去电泳分离，将你要的片段（根据理论大小）切胶回收。
因而你不用去判断是否酶切完成或者完全酶切开了（只要90%或者以上的都切开就行了）。如果你非要百分之百的切开，可能电泳也难以检测。而且意义不大。
如果你想节省内切酶，也可以切过夜。不过如果你的质粒提的质量不高，可能让质粒降解。一般两个小时足够了。
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PCR产物酶切后不能判断是否完全..
质粒如果切下来的片断不是很小,可以取少量进行电泳查看条带..如果没有完全酶切,大条带会出现单酶切的产物条带.目的基因与载体连接不是要酶切完全后连接吗，怎么判断啊实际操作中不可能全部完全的,只要有大部分酶切完全了,就可以了. 因为后面还有筛选,提质粒,测序等方法可以鉴定.....
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PCR产物酶切后不能判断是否完全..
质粒如果切下来的片断不是很小,可以取少量进行电泳查看条带..如果没有完全酶切,大条带会出现单酶切的产物条带.
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1、你的实验目的是什么？
2、如果是克隆，连接T载体后不用酶切，直接转化菌落pcr检测有目的条带的话送样测序即可。
3、如果是做表达载体构建，pcr产物和质粒DNA酶切后与没有酶切的在同一块胶上电泳，如果两个酶切位点很近，几乎看不到被切下来的小片段条带（太小，早就跑出去了）。你要是怕酶切不完全就多稍微加点酶，切的时间长一点。
4、关于酶切产物有几条带视酶切效果而定，酶切完全...
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1、你的实验目的是什么？
2、如果是克隆，连接T载体后不用酶切，直接转化菌落pcr检测有目的条带的话送样测序即可。
3、如果是做表达载体构建，pcr产物和质粒DNA酶切后与没有酶切的在同一块胶上电泳，如果两个酶切位点很近，几乎看不到被切下来的小片段条带（太小，早就跑出去了）。你要是怕酶切不完全就多稍微加点酶，切的时间长一点。
4、关于酶切产物有几条带视酶切效果而定，酶切完全则两条，一大一小（小的可能看不到，原因见3、）酶切不完全则三条带，一大一小及未切开的pcr产物；质粒的话可能还多一条环状分子和线状分子的区别。
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