cDNA文库构建的方法与过程分别是什么?

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2025/02/09 05:04:51
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cDNA文库构建的方法与过程分别是什么?
cDNA文库构建的方法与过程分别是什么?

cDNA文库构建的方法与过程分别是什么?
cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合.经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库.其基本步骤包括：RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚法等等,提取方法的选择主要根据不同的样品而定),要构建一个高质量的 cDNA 文库,获得高质量的 mRNA 是至关重要的,所以处理 mRNA 样品时必须仔细小心.由于 RNA 酶存在所有的生物中,并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境,因此建立一个无 RNA 酶的环境对于制备优质 RNA 很重要.在获得高质量的 mRNA 后,用反转录酶 Oligo(dT) 引导下合成 cDNA 第1链, cDNA 第2链的合成(用 RNA 酶 H 和大肠杆菌 DNA 聚合酶 I,同时包括使用 T4 噬菌体多核苷酸酶和大肠杆菌 DNA 连接酶进行的修复反应),合成接头的加入、将双链 DNA 克隆到载体中去、分析 cDNA 插入片断,扩增 cDNA 文库、对建立的 cDNA 文库进行鉴定.这里强调的是对载体的选择,常规用的是 λ 噬菌体,这是因为 λ DNA 两端具有由12个核苷酸的粘性末端,可用来构建柯斯质粒,这种质粒能容纳大片段的外源 DNA.

cDNA文库构建的方法与过程分别是什么? 用于构建cDNA文库的载体与普通克隆载体的区别用于构建cDNA文库的克隆载体与普通克隆载体的主要区别是什么啊? 用逆转录方法构建的cDNA文库不具有内含子,但有启动子与终止子.哪错了 cDNA文库与基因组文库的区别 基因组文库与CDNA的区别 基因组DNA文库和cDNA文库在构建原理和用途上的区别 cDNA文库是什么? 构建基因组文库方法? 构建基因组文库方法? 请问cDNA文库的滴度和噬菌体的滴度分别是什么涵义啊? Clontech公司的SMART cDNA文库构建试剂盒都有哪些东西,里面有哪些试剂? cDNA文库构建试剂盒那些公司的比较好?价格多少钱? 基因组文库和cDNA文库的区别 构建全长cDNA文库哪个试剂盒比较好 cDNA文库构建哪个公司好?价格怎么样? 哪里做酵母双杂交cDNA文库构建吗? 有哪家公司做酵母双杂交cDNA文库构建吗? cDNA文库和部分基因文库的区别cDNA文库就是部分基因文库吧?