我要用western检测一种细胞系中分泌蛋白的表达,eg:细胞因子,是检测培养液中的蛋白还是细胞抽提物种的呢我个人觉得分泌蛋白是通过分泌到细胞外之后产生作用的,那就应该检测培养液中的蛋

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 18:27:52
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我个人觉得分泌蛋白是通过分泌到细胞外之后产生作用的,那就应该检测培养液中的蛋白了,但是又是从细胞中分泌出来的,检测细胞抽提物中的应该也说得通,那究竟应该以那个为准呢?或者两个都检测,研究某种物质对此蛋白的表达量的影响时,两个地方的蛋白含量变化检测结果会是一致的吗?
或者不用western,其它的方法?免疫组化?

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你不妨对细胞内外的蛋白都做一个检测,但是检测细胞外的蛋白比较麻烦.因为培养基的成分本身很复杂.等细胞长满后用完全培养基培养24小时,然后用PBS洗两遍,加Hepes溶液,使细胞覆盖就行.培养2-3天收集培养液离心,浓缩上清至原体积的1/30-1/10,然后做western检测.如果还检测不出来就用上述液做个免疫沉淀,然后做western.但这样就误差太大,基本看不出来变化.所以建议:(1)以细胞内的蛋白做,刺激时间不要过长.(2)用表达量与此蛋白有直线相关的其他蛋白来代替,比如其信号通路上下游的一些激酶之类的.

我要用western检测一种细胞系中分泌蛋白的表达,eg:细胞因子,是检测培养液中的蛋白还是细胞抽提物种的呢我个人觉得分泌蛋白是通过分泌到细胞外之后产生作用的,那就应该检测培养液中的蛋 western blot中的一抗如何选择?是我所要检测的蛋白质只存在一种抗体适合么?还是有好多种选择?是一一对应的关系吗?实验室新手,求助各位前辈! 请问体外培养的细胞分泌到培养基的某个蛋白能用Western blotting 检测吗 谢谢! 如何从细胞、蛋白、基因水平检测T细胞受抗原刺激后分泌IFN-V情况,以评估T细胞功能?详细步骤用细胞内细胞因子染色,酶联免疫斑点法,western-blot、elisa、rt-pcr、northern-blot 什么分泌不足时,尿液中可能会检测出葡萄糖? 我要用fas bcl-2 p53 的兔抗鼠多克隆抗体检测他们的western blotting表达,二抗用HRP-羊抗兔Ig-G,请问用什么抗体稀释液好?配方是什么? western检测融合蛋白中mGM-csf的一抗二抗具体怎么选择? 为什么western blot结果中,蛋白质检测分子量会与计算大小不同 大鼠的肺组织做western前怎么处理,我的其中要检测的蛋白有磷酸化的,需要加磷酸酶抑制剂吗? 用western检测真核表达的带有flag标签的融合蛋白时,能用目的蛋白本身的抗体进行检测,但用flag抗体确无法在确保western条件没有问题的情况下,我在检测N端带有flag标签的融合蛋白时,用目的 检测磷酸化我想用western blot 检测蛋白的磷酸化,但是找不到具体的操作protocol,希望有前辈能够给张瞄瞄,一般western的protocol我有,但觉得检测磷酸化可能会有些不一样的操作,希望能够有针对 就是我要从生物中提取一种氨基酸 其他的氨基酸不要 所以我的检测目标氨基酸的纯度 细菌A分泌一种酶,可以降解细菌B产生的毒素,我要找出这种酶,并且分离纯化, 增塑剂怎样检测出来?我有一种树脂,要通过怎样的方法,可以检测其中是否含有增塑剂? 问免疫组化的抗体、和western 的一抗,可以是同一种吗?检测的是同一基因.是不是仅仅抗体稀释的程度不同 请问用Western blotting 检测培养细胞里面的基质金属蛋白酶2和9用什么抗体?培养细胞里面的基质金属蛋白酶2和9是有活性的还是酶原性的,有活性的抗原和酶原性的抗原是用同一种抗体来检测吗 western blotting 中为什么要进行蛋白样品的定量? 用什么检测尿液中蛋白质及葡萄糖含量?是一种什么试剂?