PCR时 引物的5‘端 有时需要加酶切位点 请问是怎么加上去的

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/31 12:54:14
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PCR时 引物的5‘端 有时需要加酶切位点 请问是怎么加上去的

PCR时 引物的5‘端 有时需要加酶切位点 请问是怎么加上去的
DNA合成,新链的延伸方向是5→3
因此,需要在5端加上酶切位点
酶切位点可以上网查
同时,记得再加上一些保护碱基
因为内切酶除了有特异的识别位点之外,还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结合上去,否则会掉下来
保护碱基的具体数目可以上NEB的网站查
那么,引物的结构就是（5→3）：保护碱基+酶切位点+原来的引物序列

设计引物的时候认为加上的，注意选用的酶不要把载体和目的基因切了就成，保护碱基用来使酶附着，还要在酶切位点和ATG间加入不使起始密码子移位的碱基就好了

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