微生物的生理生化特点

微生物的生理生化特点
微生物的生理生化特点

微生物的生理生化特点
微生物的特点与作用
　　三,微生物的生物学特点与作用
　　微生物除具有生物的共性外,也有其独特的特点,正因为其具有这些特点,才使得这样微不可见的生物类群引起人们的高度重视.
　　(一)种类繁多,分布广泛
　　(二)生长繁殖快,代谢能力强
　　(三)遗传稳定性差,容易发生变异
　　(一)种类繁多,分布广泛
　　种类极其繁多——已发现的微生物达10万种以上,新种不断发现.
　　分布非常广泛——可以说微生物无处不有,无处不在.
　　极端环境:冰川,温泉,火山口等极端环境;
　　土 壤:土壤是微生物的大本营,一克沃土中含菌量高达几亿甚至几十亿;
　　空 气:空气中也含有大量微生物,越是人员聚集的公共场所,微生物含量越高;
　　水:水中以江,湖,河,海中含量高,井水次之;
　　动植物体表及某些内部器官:如皮肤及消化道等.
　　微生物的多样性已在全球范围内对人类产生巨大影响.
　　土壤中微生物的种类繁多,几乎所有的微生物都能从土壤中分离筛选得到,要分离筛选某中微生物,多数情况都是从土壤采取样品.
　　首先微生物为人类创造了巨大的物质财富,目前所使用的抗生素药物,绝大多数是微生物发酵产生的,以微生物为劳动者的发酵工业,为工,农,医等领域提供各种产品.
　　另外微生物也为人类带来巨大危害,如疫病的传播,并且引起疫病传播的新微生物种类总不断出现.
　　(二)生长繁殖快,代谢能力强
　　大肠杆菌(Escherichia coli)在适宜的条件下,每20分钟即繁殖一代,24小时即可繁殖72代,由一个菌细胞可繁殖到47×1022个,如果将这些新生菌体排列起来,可绕地球一周有余;
　　生理基础:因为微生物的代谢能力很强, 由于微生物个体微小,单位体积的表面积相对很大,有利于细胞内外的物质交换,细胞内的代谢反应较快.
　　极大的物质资源:正因为微生物具有生长快,代谢能力强的特点,才使得微生物能够成为发酵工业的产业大军,在工,农,医等战线上发挥巨大作用;
　　在物质转化中的作用:如果没有微生物,自古以来的动,植物尸体不能分解腐烂,早已是动,植物尸体堆积如山,布满全球.
　　(三)遗传稳定性差,容易发生变异
　　微生物个体微小,对外界环境很敏感,抗逆性较差,很容易受到各种不良外界环境的影响;另外,微生物的结构简单,缺乏免疫监控系统, 很容易变异.
　　微生物的遗传不稳定性,是相对高等生物而言的,实际上在自然条件下,微生物的自发突变频率为10-6左右.
　　微生物的遗传稳定性差,给微生物菌种保藏工作带来一定不便.
　　另一方面,正因为微生物的遗传稳定性差,其遗传的保守性低,使得微生物菌种培育相对容易得多.通过育种工作,可大幅度地提高菌种的生产性能,其产量性状提高幅度是高等动,植物所难以实现的.
　　微生物学及其分支学科
　　一,微生物学及其研究对象
　　二,微生物学的分支学科
　　一,微生物学及其研究对象
　　微生物学概念:概括地讲,微生物学(Microbiology)是研究微生物及其生命活动规律的学科.
　　研究对象:研究的主要内容涉及微生物的形态结构,营养特点,生理生化,生长繁殖,遗传变异,分类鉴定,生态分布以及微生物在工业,农业,医疗卫生,环境保护等各方面的应用.研究微生物及其生命活动规律之目的在于充分利用有益微生物,控制有害微生物,使这些微小生物更好地贡献于人类文明.
　　二,微生物学的分支学科
　　(一)根据基础理论研究内容不同,形成的分支学科
　　微生物生理学(Microbiol Physiology)
　　微生物遗传学(Microbiol Genetics)
　　微生物生物化学(Microbiol Biochemistry)
　　微生物分类学(Microbiol Taxonomy)
　　微生物生态学等(Microbiol Ecology).
　　(二)根据微生物类群不同,形成的分支学科
　　细菌学(Bacteriology)
　　病毒学(Virology)
　　真菌学(Fungi)
　　放线菌学(Actinomycetes)等.
　　(三)根据微生物的应用领域不同,形成的分支学科
　　工业微生物学(Intustrial Microbiology)
　　农业微生物学(Agricultural Microbiology)
　　医学微生物学(Medical Microbiology)
　　药用微生物学(Patherological Microbiology)
　　食品微生物学(Food Microbiology)
　　兽医微生物学(Viterinary Microbiology)等.
　　(四)根据微生物的生态环境不同,形成的分支学科
　　土壤微生物学(Soil Microbiology)
　　海洋微生物学(Marine Microbiology)等.
　　第三节 食品微生物学及其研究内容
　　食品微生物学:食品微生物学是专门研究与食品有关的微生物的种类,特点及其在一定条件下与食品工业关系的一门学科.
　　尽管人类对食品微生物研究的历史很长,但作为微生物学的一门独立的分支学科——食品微生物学,其仍属一门新兴学科.尤其在我国,人们对食品科学的重视仅是改革开放以来,人们解决了温饱问题之后的事情;食品微生物学是随着食品科学的发展而产生的一个重要的学科.
　　食品微生物研究的主要内容包括三个方面:
　　一,在食品工业中有益的微生物及其应用;
　　二,在食品保藏过程中引起食品变质的微生物及其控制;
　　三,与食品卫生有关的微生物.
　　第四节 微生物学的发展简史
　　我们把这个过程分成以下四个阶段加以阐述.
　　一,微生物学的史前时期
　　二,微生物的发现与微生物学的启蒙时期
　　三,微生物学的形成时期
　　四,微生物学的发展时期
　　一,微生物学的史前时期
　　盲目应用时期.
　　人类已经在很多方面利用了微生物,世界各国人民在自己的生产实践中都积累了很多利用有益微生物和防治有害微生物的经验.北魏的贾思勰《齐民要术》一书中,就详细记载了制醋的方法.我国古代劳动人民就利用了盐腌,糖渍,烟熏,风干等.
　　二,微生物发现与微生物学启蒙时期
　　十七世纪,荷兰人吕文虎克(Antony van Leeuwenhock)发明了第一台简易显微镜(200～300倍).
　　于1669年出版了《安东.列文虎克所发现的自然界秘密》.
　　随后在近200年的时期,随着显微镜的不断改进,分辨率的提高,人们对微生物的认识由粗略的形态描述逐步发展到对微生物进行详细的观察和根据形态进行分类研究,形成了启蒙的微生物学.
　　三,微生物学的形成时期
　　由研究微生物形态的启蒙时期到对微生物的生理生化水平研究时期.
　　巴斯德(Louis Pasteur, 1822～1895)通过对酒曲的研究,证明了酒曲发酵是其中的酵母菌代谢作用,这一研究结果把对微生物的研究由形态转向生理生化研究水平,为微生物学的形成和发展奠定了基础.巴斯德还通过大量实验证明了食品的腐败变质是遭受微生物污染后,微生物生长繁殖而引起的,从根本上否定了"微生物自然发生说".
　　微生物学的另一位奠基人是一位德国医生柯赫(Robert Koch, 1843～1910),他为疾病的病原学说建立了基础.
　　首先从患病动物的病变脏器中分离纯化得到病原菌,通过将病原菌接种回到动物体内,能引起相同症状的疾病,证明了传染病是由某些特定的病原菌传播的.
　　由于巴斯德和柯赫对微生物学的形成作出了极大的贡献,普遍认为,他们两位是微生物学的奠基人.
　　四,微生物学的发展时期
　　本世纪是微生物学的全面发展时期:
　　细胞的结构与功能,细菌的代谢等;
　　微生物在工农业生产上发挥巨大作用;
　　微生物成为生物学研究的主要研究材料;
　　50年代DNA双螺旋解密后,微生物又成了分子生物学的主要研究材料.微生物学,遗传学和生物化学的相互渗透与作用导致了现代分子遗传学的诞生与发展;
　　进入70年代,在微生物的研究基础上,导致了DNA重组技术和基因工程的发展.
　　微生物常规鉴定技术
　　一、形态结构和培养特性观察
　　1、微生物的形态结构观察主要是通过染色,在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察,直观地了解细菌在形态结构上特性,根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的.
　　2、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）.不同微生物在某种培养基中生长繁殖,所形成的菌落特征有很大差异,而同一种的细菌在一定条件下,培养特征却有一定稳定性.,以此可以对不同微生物加以区别鉴定.因此,微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容.
　　1）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上,观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等.在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等.半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况.（图3－8）
　　图3－8 细菌的培养特征
　　1.点状 2.圆形 3.丝状 4.不规则形 5.假根状 6.纺锤状 7.扁平 8.隆起 9.凸起 10.垫状 11.脐状 12.边缘整齐 13.波状 14.裂片状 15.啮蚀状 16.丝状 17.卷发状 18.丝线状 19.刺毛状 20.串珠状 21.疏展状 22.树根状 23.假根状 24.丝状 25.串珠状 26.乳头状 27.绒毛状 28.树根状 29.量杯状 30.萝卜状 31.漏斗状 32.囊状 33.层状 34.絮状 35.环状 36.蹼状 37.膜状
　　2）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体,在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似,只是比细菌菌落大且厚.液体培养也和细菌相似,有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜.霉菌有分支的丝状体,菌丝粗长,在条件适宜的培养基里,菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延.霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色,因而菌落边缘和中心,正面和背面颜色常常不同,如青霉菌：孢子青绿色,气生菌丝无色,基内菌丝褐色.霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落.
　　二、生理生化试验
　　微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物.因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一.
　　微生物检验中常用的生化反应有：
　　1、糖酵解试验
　　不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气.可用指示剂及发酵管检验.
　　试验方法：以无菌操作,用接种针或环移取纯培养物少许,接种于发酵液体培养基管,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种.接种后,置36±1.0°C培养,每天观察结果,检视培养基颜色有无改变（产酸）,小倒管中有无气泡,微小气泡亦为产气阳性,若为半固体培养基,则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡,有时还可看出接种菌有无动力,若有动力、培养物可呈弥散生长.
　　本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力,从而进行各种细菌的鉴别,因而每次试验,常需同时接种多管.一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫,溴百里蓝和An-drade指示剂.
　　2、淀粉水解试验
　　某些细菌可以产生分解淀粉的酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖.淀粉水解后,遇碘不再变蓝色.
　　试验方法：以18~24h的纯培养物,涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种,试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中,于36±1°C培养24~48h,或于20°培养5天.然后将碘试剂直接滴浸于培养表面,若为液体培养物,则加数滴碘试剂于试管中.立即检视结果,阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化.阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色.
　　淀粉水解系逐步进行的过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间,培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系.培养基pH必须为中性或微酸性,以pH7.2最适.淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱,因而以临用时制备为妥.
　　3、V-P试验
　　某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物,称V－P（+）反应.
　　试验方法：
　　1）O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养48h,培养液1ml加O’Meara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml,摇动试管1~2min,静置于室温或36±1°C恒温箱,若4h内不呈现伊红、即判定为阴性.亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者.
　　2）Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°Cα萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml,摇动2~5min,阳性菌常立即呈现红色,若无红色出现,静置于室温或36±1°C恒温箱,如2h内仍不显现红色、可判定为阴性.
　　3）快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环,乳化接种于其中,加入5%α-萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动后放置5min,判定结果.不产酸的培养物不能使用.
　　本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别.在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时,通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生,故应省去或以氯化钠代替.
　　4、甲基红（Methyl Red）试验
　　肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸,进一步分解中,由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培养基PH值下降至pH4.5以下,使甲基红指示剂变红.
　　试验方法：挑取新的待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）3~5天,从第二天起,每日取培养液1ml,加甲基红指示剂1~2滴,阳性呈鲜红色,弱阳性呈淡红色,阴性为黄色.迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果.
　　甲基红为酸性指示剂,pH范围为4.4~6.0,其pK值为5.0.故在pH5.0以下,随酸度而增强黄色,在pH5.0以上,则随碱度而增强黄色,在pH5.0或上下接近时,可能变色不够明显,此时应延长培养时间,重复试验.
　　5、靛基质（Imdole）试验
　　某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚.吲哚的存在可用显色反应表现出来.吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物.
　　试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养基管,于36±1C培养24h时后,取约2ml培养液,加入Kovacs氏试剂2~3滴,轻摇试管,呈红色为阳性,或先加少量乙醚或二甲苯,摇动试管以提取和浓缩靛基质,待其浮于培养液表面后,再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴,在接触面呈红色,即为阳性.
　　实验证明靛基质试剂可与17种不的靛基质化合物作用而产生阳性反应,若先用二甲苯或乙醚等进行提取,再加试剂,则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色,因而结果更为可靠.
　　6、硝酸盐（Nitrate）还原试验
　　有些细菌具有还原硝酸盐的能力,可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等.亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验.
　　试验方法：临试前将试剂的A（磺胺酸冰醋酸溶液）和B（α－萘胺乙醇溶液）试液各0.2ml等量混合、取混合试剂约0.1ml、加于液体培养物或琼脂斜面培养物表面,立即或于10min内呈现红色即为试验阳性,若无红色出现则为阴性.
　　用α-萘胺进行试验时,阳性红色消退很快、故加入后应立即判定结果.进行试验时必须有未接种的培养基管作为阴性对照.α-萘胺具有致癌性、故使用时应加注意.
　　7、明胶（Gelatin）液化试验
　　有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶）,能将明胶先水解为多肽,又进一步水解为氨基酸,失去凝胶性质而液化.
　　试验方法：挑取18~24h待试菌培养物,以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基.于20~22℃培养7~14天.明胶高层亦可培养于36±1℃.每天观察结果,若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细菌液化,如确被液化,即为试验阳性.平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂,若为阳性,10~20min后,菌落周围应出现清晰带环.否则为阴性.
　　8、尿素酶（Urease）试验
　　有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色.尿素酶不是诱导酶,因为不论底物尿素是否存在,细菌均能合成此酶.其活性最适pH为7.0.
　　试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中,摇均,于36±1℃培养10,60和120min,分别观察结果.或涂布并穿刺接种于琼脂斜面,不要到达底部,留底部作变色对照.培养2,4和24h分别观察结果,如阴性应继续培养至4天,作最终判定,变为粉红色为阳性.
　　9、氧化酶（Oxidase）试验
　　氧化酶亦即细胞色素氧化酶,为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶,氧化酶先使细胞色素C氧化,然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,产生颜色反应.
　　试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴,阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色,Ewing氏改进试剂呈蓝色.阴性者无颜色改变.应在数分钟内判定试验结果.
　　10、硫化氢（H2S）试验
　　有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物,而产生硫化氢气体,硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物.
　　试验方法：在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中,沿管壁穿刺接种,于36±1℃培养24~28h,培养基呈黑色为阳性.阴性应继续培养至6天.也可用醋酸铅纸条法：将待试菌接种于一般营养肉汤,再将醋酸铅纸条悬挂于培养基上空,以不会被溅湿为适度；用管塞压住置36±1℃培养1~6天.纸条变黑为阳性.
　　11、三糖铁（TSI）琼脂试验
　　试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物,穿刺接种并涂布于斜面,置36±1℃培养18~24h,观察结果.
　　本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）.葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色.
　　12、硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验
　　试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约1/2深度,置36±1℃培养18~24h,观察结果.培养物呈现黑色为硫化氢阳性,混浊或沿穿刺线向外生长为有动力,然后加Kovacs氏试剂数滴于培养表面,静置10min,若试剂呈红色为靛基质阳性.培养基未接种的下部,可作为对照.
　　本试验用于肠杆菌科细菌初步生化筛选,与三糖铁琼脂等联合使用可显著提高筛选功效.
　　三、血清学试验
　　血清学反应是指：相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用,可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象.在食品微生物检验中,常用血清学反应来鉴定分离到的细菌,以最终确认检测结果.
　　血清学反应的一般特点：
　　1)抗原体的结合具有特异性,当有共同抗原体存在时,会出现交叉反应.
　　2)抗原体的结合是分子表面的结合,这种结合虽相当稳定,但是可逆的.
　　3)抗原体的结合是按一定比例进行的,只有比例适当时,才能出现可见反应.
　　4)血清学反应大体分为两个阶段进行,但其间无严格界限.第一阶段为抗原体特异性结合阶段,反应速度很快,只需几秒至几分钟反应即可完毕,但不出现肉眼可见现象.第二阶段为抗原体反应的可见阶段,表现为凝集、沉淀、补体结合反应等.反应速度慢,需几分、几十分以至更长时间.而且,在第二阶段反应中,电解质、PH、温度等环境因素的变化,都直接影响血清学反应的结果.
　　习惯上将经典的血清学反应分三种类别：凝集反应、沉淀反应和补体结合反应.
　　1、凝集反应
　　颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合,在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象,称为凝集反应（Agglutination reaction）.其中的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素.在该反应中,因为单位体积抗体量大,做定量实验时,应稀释抗体.
　　1）直接凝集反应
　　颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应,称为直接凝集反应(Direct agglution reaction).
　　a.玻片凝集法.是一种常规的定性试验方法.原理是用已知抗体来检测未知抗原.常用于鉴定菌种、血型.如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴,在玻片上混匀,数分种后若出现肉眼可见的凝集块,即阳性反应,证明该菌是痢疾杆菌.此法快速、简便,但不能进行定量测定.
　　b.试管凝集法.是一种定量试验方法.多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量.常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查.如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验.因为要测定抗体的含量,故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度,然后加入等量抗原,37℃或56℃,2~4小时观察,血清最高稀释度仍有明显凝集现象的,为该抗血清的凝集效价.
　　2）间接凝集反应
　　将可溶性抗原（抗体）先吸附在一种与免疫无关的,颗粒状微球表面,然后与相应抗体（抗原）作用,在有电解质存在的条件下,即可发生凝集,称为间接凝集反应(Indirect agglutination).由于载体增大了可溶性抗原的反应面积.当载体上有少量抗原与抗体结合.就出现肉眼可见的反应,敏感性很高.
　　2、沉淀反应
　　可溶性抗原与相应抗体结合,在有适量电解质存在下,经过一定时间,形成肉眼可见的沉淀物,称为沉淀反应（Precipitation）.反应中的抗原称为沉淀原,抗体为沉淀素.由于在单位体积内抗原量大,为了不使抗原过剩,故应稀释抗原,并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价.
　　1）环状沉淀反应：是一种定性试验方法,可用已知抗体检测未知抗原.将已知抗体注入特制小试管中,然后沿管壁徐徐加入等量抗原,如抗原与抗体对应,则在两液界面出现白色的沉淀圆环.
　　2）絮状沉淀反应：将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀,如抗原抗体对应,而又二者比例适当时,会出现肉眼可见的絮状沉淀,此为阳性反应.
　　3）琼脂扩散试验：利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散,若抗原抗体对应,且二者比例合适,在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀线.每对抗原抗体可形成一条沉淀线.有几对抗原抗体,就可分别形成几条沉淀线.琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种类型.单向扩散是一种定量试验.可用于免疫蛋白含量的测定.而双向扩散多用于定性试验.由于方法简便易行,常用于测定分析和鉴定复杂的抗原成分.
　　3、补体结合反应
　　补体结合反应(Complement fixation reaction)是在补体参与下,以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应.补体无特异性,能与任何一组抗原抗体复合物结合而引起反应.如果补体与绵羊红细胞、溶血素的复合物结合,就会出现溶血现象,如果与细菌及相应抗体复合物结合,就会出现溶菌现象.因此,整个试验需要有补体、待检系统（已知抗体或抗原、未知抗原或抗体）及指示系统（绵羊细胞和溶血素）五种成份参加.其试验原理是补体不单独和抗原或抗体结合.如果出现溶菌,是补体与待检系统结合的结果,说明抗原抗体是相对应的,如果出现溶血,说明抗原抗体不相对应.此反应操作复杂,敏感性高,特异性强,能测出少量抗原和抗体,所以应用范围较广