PCR污染问题怎么监测和预防?PCR放大效果虽然是很好,但是太容易污染了,有什么好建议没?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/16 20:46:51
PCR污染问题怎么监测和预防?PCR放大效果虽然是很好,但是太容易污染了,有什么好建议没?
PCR污染问题怎么监测和预防?
PCR放大效果虽然是很好,但是太容易污染了,有什么好建议没?
PCR污染问题怎么监测和预防?PCR放大效果虽然是很好,但是太容易污染了,有什么好建议没?
这两天正好看到一个“2012年全国公安司法及血液中心标准DNA实验室装备展览会”的宣传文章说这个问题,复制来给你看看吧.
PCR室污染监测及防御
2012年全国司法及血液中心国际标准DNA实验室观摩会将在明年6月于青岛国际会展中心举行,这次观摩会秉着打造全球顶尖展会的理念,将展示具有世界一流水平,符合国际标准的DNA实验室样板间.并将在展示过程中向参会人员免费发放实验室解决方案,本文就是日前由组委会展示的该系列方案中的一部分.
PCR反应最大的魅力是扩增力能与高灵敏度,但易污染一直是困扰各实验室的大问题,极微量的污染就可能造成假阳性反应,破坏试验结果.如何监测与防止PCR污染,是现在各实验室的重要课题.
一、污染监测
一个好的PCR实验室,必须要时刻注意污染的监测,考虑是否受到污染,如有污染,是何原因造成的.通过有效地监测,采取正确的相应措施,防止或消除污染.
对照试验是监测PCR污染的重要手段.
1、阴性对照：阴性对照是每次PCR实验都必须做的.它包括了标本对照与试剂对照,通过对照确认样本和试剂是否受到感染.
2、阳性对照：它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志.阳性对照要选择扩增度中等、重复性好、经鉴定是该产物的标本.但阳性对照其对检测或扩增样品污染的可能性很大.因而当某一PCR试剂已经使用稳定,检验人员完全掌握时,在之后的实验中应尽可能免设阳性对照.来减小污染概率.
3、选择不同区域的引物进行PCR扩增.
4、重复性试验.
二、防止污染的方法
1、合理分隔实验室：将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增以及PCR产物的鉴定等步骤进行分区或者分室,尤其要将样本处理和PCR产物的鉴定与其它步骤严格分开.理想的分区为,标本处理区、PCR反应液制备区、PCR循环扩增区、PCR产物鉴定区.
2、PCR试剂要做好预混和分装：所有的PCR试剂都应进行小量分装,PCR反应液应尽可能预先配制好,然后再小量分装,在-20℃下保存,以减少重复加样次数,从而避免污染机会.另外,PCR试剂、PCR反应液应当与样品及PCR产物分开保存,不可放于同一冰盒或冰箱.
3、吸样枪污染防护：吸样枪是一个非常容易发生污染的设备.如操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘在枪头上,将会成为一个严重的污染源,因而使用吸样枪时要格外小心,吸样要慢,并尽量一次性完成,忌多次抽吸,避免发生交叉污染或气溶胶污染.
4、减少PCR循环次数：以PCR产物达到检测水平为宜.
5、防止操作人员污染：使用一次性手套、吸头、小离心管.
防止PCR污染的方法目前是有成套的规定的，特别是用于临床诊断的。你可以借鉴一下：
1。所有试剂盒，用具都是专用。
2. 加样在通风橱内完成，防止空气中气溶胶的污染
3. 枪头使用带有滤片的，防止移液器造成的交叉污染
4. 分析结果不要再加样区，最好不在一个房间，防止扩增产物的污染。...
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防止PCR污染的方法目前是有成套的规定的，特别是用于临床诊断的。你可以借鉴一下：
1。所有试剂盒，用具都是专用。
2. 加样在通风橱内完成，防止空气中气溶胶的污染
3. 枪头使用带有滤片的，防止移液器造成的交叉污染
4. 分析结果不要再加样区，最好不在一个房间，防止扩增产物的污染。
收起
加入positive control和negative control来监测
预防的话当然就是操作小心一点了……比如先把管离心了再取样，我觉得现在的实验条件没那么容易污染吧