载体双酶切后消失,怎样解决我用的是bamh1,xho1两个酶（Fermentas公司的,用的是bufferR）,双酶切pFastBac1这个载体,50微升反应体系,只切3个小时,各用1微升的酶,跑胶一点都看不到有大片段,可以看到
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 20:35:18
载体双酶切后消失,怎样解决我用的是bamh1,xho1两个酶（Fermentas公司的,用的是bufferR）,双酶切pFastBac1这个载体,50微升反应体系,只切3个小时,各用1微升的酶,跑胶一点都看不到有大片段,可以看到
载体双酶切后消失,怎样解决
我用的是bamh1,xho1两个酶（Fermentas公司的,用的是bufferR）,双酶切pFastBac1这个载体,50微升反应体系,只切3个小时,各用1微升的酶,跑胶一点都看不到有大片段,可以看到结果是一很长的一条拖带,不酶切的对照,及t载体对照都用一样的体系却比很明显,已重复至少5次了,觉得是载体被切没有了.请问我该如何改进我的酶切反应,还有就是,是不是pFastBac1这个载体的问题,有没有人做过这个载体,知道是怎么回事吗?
载体双酶切后消失,怎样解决我用的是bamh1,xho1两个酶（Fermentas公司的,用的是bufferR）,双酶切pFastBac1这个载体,50微升反应体系,只切3个小时,各用1微升的酶,跑胶一点都看不到有大片段,可以看到
fermentas 目录上有,bamh1 ph大于8.0时有很强的星号活性,bufferR ,ph 8.5,可以换buffer G试下
我觉得这种专业问题
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温度尽量低，切的时间长一点。。。估计是出信号活性了，我原来切Sma1、Sac1时也出过这事，最后是16度切了22小时才过关。。。切了9次。。
载体我不知道，要不还有个可能，这两个酶的酶切位点过近也是切不出来的，但这个我没亲眼看见，是师姐告诉我的
另外，最好是PCR或提质粒产物不经过冷冻，直接酶切，成功率也会高一点...
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温度尽量低，切的时间长一点。。。估计是出信号活性了，我原来切Sma1、Sac1时也出过这事，最后是16度切了22小时才过关。。。切了9次。。
载体我不知道，要不还有个可能，这两个酶的酶切位点过近也是切不出来的，但这个我没亲眼看见，是师姐告诉我的
另外，最好是PCR或提质粒产物不经过冷冻，直接酶切，成功率也会高一点
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