有关标记基因和受体细胞的筛选的问题在大肠杆菌的质粒上有抗四环素基因那么它作为标记基因和目的基因的载体形成重组质粒由于这个重组质粒与普通大肠杆菌中未重组的质粒一样具有四
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 13:52:00
有关标记基因和受体细胞的筛选的问题在大肠杆菌的质粒上有抗四环素基因那么它作为标记基因和目的基因的载体形成重组质粒由于这个重组质粒与普通大肠杆菌中未重组的质粒一样具有四
有关标记基因和受体细胞的筛选的问题
在大肠杆菌的质粒上有抗四环素基因
那么它作为标记基因和目的基因的载体形成重组质粒
由于这个重组质粒与普通大肠杆菌中未重组的质粒一样具有四环素抗性
若再用大肠杆菌作为受体细胞,这个筛选机制不是会失效吗?
我个人认为不能再用大肠杆菌作为受体细胞,可是教科书上的例子就是用的大肠杆菌
有关标记基因和受体细胞的筛选的问题在大肠杆菌的质粒上有抗四环素基因那么它作为标记基因和目的基因的载体形成重组质粒由于这个重组质粒与普通大肠杆菌中未重组的质粒一样具有四
首先,不是任何大肠杆菌都可以作为受体菌的,感受态细胞就是受体细胞需要选择对抗性标记敏感的菌株,就是说如果准备转化入受体菌的重组质粒用四环素做标记,受体菌本身对四环素是敏感的才行,否则就得更换菌株或者更换筛选标记.
其次,标记基因和目的基因(用你举例的四环素)是体外利用基因工程技术重组到一起的,然后转化入对四环素敏感的受体株才可以进行四环素筛选,能存活的就是阳性,不能得就是质粒没转入
当然了,看是否成功制备除了抗性标记的初步筛选还得进一步酶切电泳测序或者目的基因产物测定
用于基因操作的大肠杆菌菌株不含有任何抗生素抗性
未转染情况下不存在 amp kan 或ter抗性也就是说在重组前的质粒不存在抗性基因 那么所谓的标记基因难道是存在于目的基因上的吗? 这不合理,用作载体的质粒是一定要有标记基因的重组前的质粒当然带抗性了! 转化前的菌株是不带抗性的!不好意思 还是不是很明白 为什么同样有抗性质粒,转化前的菌株不带抗性,转化后的菌株就带抗性了?质...
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用于基因操作的大肠杆菌菌株不含有任何抗生素抗性
未转染情况下不存在 amp kan 或ter抗性
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1. 受体细胞也就是感受态细胞不含质粒,也没有任何抗性;
2. 未转入质粒的受体细胞被四环素抑制,不能生长;
3. 转入抗四环素基因质粒的受体细胞能抗四环素,就生长成菌落。
大肠杆菌细胞中是有质粒,当然有抗性基因。我们用的运载体不一定非用大肠杆菌的质粒,可以用噬菌体,动植物病毒,其他细菌的质粒(书上有),不同微生物的质粒上的抗性基因是不同的。在抗生素培养基上检测是否导入目的基因,就注意选择抗生素不与大肠杆菌里的抗性基因冲突就行了。你这样说是对的,我也认为不能冲突 但是书上(浙科版选修3)的例子中就是用的大肠杆菌的质粒 同时用大肠杆菌作为受体 这不是明显冲突了吗...
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大肠杆菌细胞中是有质粒,当然有抗性基因。我们用的运载体不一定非用大肠杆菌的质粒,可以用噬菌体,动植物病毒,其他细菌的质粒(书上有),不同微生物的质粒上的抗性基因是不同的。在抗生素培养基上检测是否导入目的基因,就注意选择抗生素不与大肠杆菌里的抗性基因冲突就行了。
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起初的宿主大肠杆菌是不带有任何抗性基因的。当需要将某片段外源基因在大厂杆菌内表达,那么需要选择一个合适的表达载体,这个载体上就会含有标记基因,如四环素。然后目的片段装入载体中,转入宿主细胞。由于原先宿主细胞不含有此重组载体,也就是不含标记基因,它会在抗性(如四环素)选择培养基的筛选作用下不生长;而转入了重组质粒的宿主细胞会带有这种标记基因(或者说成抗性基因),在含有抗生素的培养基里仍能成长。...
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起初的宿主大肠杆菌是不带有任何抗性基因的。当需要将某片段外源基因在大厂杆菌内表达,那么需要选择一个合适的表达载体,这个载体上就会含有标记基因,如四环素。然后目的片段装入载体中,转入宿主细胞。由于原先宿主细胞不含有此重组载体,也就是不含标记基因,它会在抗性(如四环素)选择培养基的筛选作用下不生长;而转入了重组质粒的宿主细胞会带有这种标记基因(或者说成抗性基因),在含有抗生素的培养基里仍能成长。
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