小量制备质粒DNA时发现质粒DNA不能被限制酶所切割,可能的原因是什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/29 09:30:38
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3）将离心管放入煮沸的水浴中,时间恰为40秒.
8）小心吸去上清液,将离心管倒置于一张纸巾上,以使所有液体流出.再将附于管壁的液滴除尽.除去上清的简便方法是用一次性使用的吸头与真空管道相连,轻缓抽吸,并用吸头接触液面.当液体从管中吸出时,尽可能使吸头远离核酸沉淀,然后继续用吸头通过抽真空除去附于管的液滴.
如果小量制备的DNA不被限制酶切开,很有可能在收获细菌的步骤3）或上述步骤8）未能很好地去除所有液体.这种情况下,可用酚：氯仿抽提DNA终产物,然后用乙醇重新沉淀DNA,通常,用5－10倍过量的酶（特别是并不昂贵的酶）在100-200μl 体积中进行消化,可以克服限制酶切割反应遇到切割反应遇到的困难.消化后,加0.1 体积3mol/L乙酸钠（pH5.2)和2倍体积乙醇沉淀DNA.
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