盐析法和透析法的区别在哪里?透析袋的原理及方法?盐析操作注意事项?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/19 15:49:19
盐析法和透析法的区别在哪里?透析袋的原理及方法?盐析操作注意事项?
盐析法和透析法的区别在哪里?透析袋的原理及方法?盐析操作注意事项?
盐析法和透析法的区别在哪里?透析袋的原理及方法?盐析操作注意事项?
盐析法和透析法：
盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离.
胶体的盐析是加盐而使胶粒的溶解度降低,形成沉底析出的过程,是胶体的聚沉现象的一种.
透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜,而大分子物质不能通过半透膜的性质,达到分离的方法.
透析袋的原理：透析是指溶质从半透膜的一侧透过膜至另一侧的过程,任何天然的（如腹膜）或人造的半透膜,只要该膜含有使一定大小的溶质通过的孔径,那么这些溶质就可以通过弥散和对流从膜的一侧移动到膜的另一侧.人体内的毒物包括代谢产物,药物,外源性毒物,只要其原子量或分子量大小合适,就能够通过透析清除体外.其基本原理是弥散和对流.弥散就是半透膜两侧液体各自所含溶质浓度梯度及它所形成的不同渗透浓度,溶质从浓度高的一侧通过半透膜向浓度低的一侧移动.对流也称超滤,是指溶质和溶剂因透析膜两侧的静水压和渗透压梯度的不同而跨膜转运的过程.
透析袋的使用方法
使用前处理：
1.把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段.
2.在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 10mmol/L EDTA(pH8.0)中将透析袋煮沸10分钟.
3.用蒸馏水彻底清洗透析袋.
4.放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟.
5.冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内.从此时起取用透析袋是必须戴手套.
6.用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净.
盐析操作注意事项
1.盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度,溶液pH值越接近蛋白的等电点,蛋白质越容易沉淀.
2.盐析一般用的硫酸铵,容易吸潮,因而在使用前,一般先磨碎,平铺放入烤箱内60摄氏度烘干后再称量,这样更准确.
3.在加入盐时应该缓慢均匀,搅拌也要缓慢,越到后来速度应该更注意缓慢,如果出现一些未溶解的盐,应该等其完全溶解后再加盐,以免引起局部的盐浓度过高,导致酶失活.
4.盐析后最好搅拌40分钟到一个小时而且再在冰浴中放置一段时间.3.5为了避免盐对酶的影响,一般脱盐处理后再测酶活性.
5.盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理,以免变性,透析较慢,一般可用超滤或者G-25,G-50 处理.
6.一般粗提物蛋白完全沉淀是在硫酸铵浓度在70%左右.