在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/22 20:51:22
在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选?
在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选?
在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选?
第一次筛选出已杂交的细胞
第二次筛选出骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合的细胞
所以要筛选两次.
第一次是筛选杂交瘤细胞和其他细胞
第二次是筛选能产生抗体的杂交瘤细胞和不能产生抗体的杂交瘤细胞
两次筛选的目的不同，现在的技术只能分两次筛选，以后或许能一次筛选出能产生抗体的杂交瘤细胞
因为用b-cell与骨髓瘤cell融合的时候会发生同核同核，即b-cell和b-cell融合，骨髓瘤和骨髓瘤细胞融合，所以第一次筛选的目的就是剔除以上两种同核融合
同时b细胞和骨髓瘤细胞融合的杂交细胞中，由于一种免疫了的b细胞只能分泌一种特异抗体，所以融合的b细胞不一定都是能产生我们想要的抗体的b细胞，所以第二次筛选就是要选出能产生我们所要抗体的b细胞的杂交细胞，即目的单克隆抗体...
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因为用b-cell与骨髓瘤cell融合的时候会发生同核同核，即b-cell和b-cell融合，骨髓瘤和骨髓瘤细胞融合，所以第一次筛选的目的就是剔除以上两种同核融合
同时b细胞和骨髓瘤细胞融合的杂交细胞中，由于一种免疫了的b细胞只能分泌一种特异抗体，所以融合的b细胞不一定都是能产生我们想要的抗体的b细胞，所以第二次筛选就是要选出能产生我们所要抗体的b细胞的杂交细胞，即目的单克隆抗体
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第一次筛选：
（1）筛选对象：脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞（即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液）。另有少量多细胞聚体，因寿命短而迅速死亡，故无需特殊筛选。
（2）筛选方法：用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。（注重：HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路，而次黄嘌呤在磷...
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第一次筛选：
（1）筛选对象：脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞（即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液）。另有少量多细胞聚体，因寿命短而迅速死亡，故无需特殊筛选。
（2）筛选方法：用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。（注重：HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路，而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。）
（3）筛选结果：脾-瘤细胞正常生长，其它细胞都会死亡。（析因：脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，虽有核酸合成的旁通路，但不能长期增殖；瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶，核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断，因核酸合成障碍而死亡；脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶，虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。）
第二次筛选：
（1）筛选对象：多克隆杂交瘤细胞群体。（即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。）
（2）筛选方法：抗体检测（ 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等，实际上是利用稀释法，在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养，然后检查每孔中产生特定抗体的能力）。
（3）筛选结果：产生专一性抗体的杂交瘤细胞。
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