用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/19 12:45:10
用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计
用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列
我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计引物做TAIL-PCR,产物都在1000bp以上,侧序后刨除那300-500bp 后,剩下的碱基就应该是整合在基因组上的序列才对啊,可是还是载体上的序列(比如扩增3‘,载体上的序列指的是5’的碱基),难道是酶切失败,还是说酶切后又自连,整个环状质粒载进去了.那如果是环状的质粒还能整合到基因组中吗?还能表达吗?
大家有没有遇到过这种情况啊?现在是一点头绪也没有啦!
用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计
我说说我的理解,仅供参考:
你本来的意图,是通过载体线性化后,外源基因与基因组同源位点的双交换,将其整合入基因组中,对吗?
如果说是整个环状质粒导入基因组,从理论上来说是有可能的,单酶切就可以了,而且概率比双酶切还要高,虽然我们一般都用线性材料转基因.
如果想验证一下是不是质粒整合进入的,我觉得既然TAIL-PCR就是做染色体步查的,如果你有时间,再往前走一段看看.
不过如果是环状整合的话,基因组有很大一段插入,从理论上是不能表达了.
这个是得问 专业人士