Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/21 12:28:47
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你可以是试试,Takara的LA试剂盒!这个我们实验室就是用的这么,TAIL-pcr 不太好用!我觉得!
虽然TALL-PCR有着上述众多的优点,但是它仍然存在着不尽人意的地方： TAIL-PCR反应需要较多的引物组合.此外,由于AP引物存在有限的结合位点,对于个别的侧翼序列,即使使用不同的简并引物也难以扩增到阳性结果.整个TAIL-PCR需要一系列连续的反应,反应条件的设置要求比较精细[51].
1.5.3 利用接头的染色体步移技术
此技术是一个用来扩增基因组中已知序列两侧未知序列的方法.其原理如下：首先,用几种限制性内切酶酶切基因组DNA,然后将酶切后的DNA与体外合成的接头在适当的条件下连接,取适量连接产物直接作为PCR模板进行PCR反应,其中一条引物为接头特异引物,其序列能与接头序列互补,另一条引物为基因特异引物,其序列与已知序列互补.最后将得到的PCR产物测序[53].
根据这个原理,TaKaRa公司推出了LA PCRTM in vitro Cloning试剂盒(DDR015)来克隆基因侧翼未知序列,其流程如图1-4.因为在设计上,Cassette的5′末端没有磷酸基,所以Target DNA的3′末端和Cassette的5′末端的连接部位形成缺口.在第一次PCR反应的第一个循环时,从Primer C1开始的延伸反应在连接部位终止,限制了Primer C1和Primer C1同一引物之间的扩增,从而控制了非特异性PCR扩增.只有从Primer S1开始延伸合成的DNA链,才能成为Primer C1的模板,进行DNA的特异性扩增反应.再用内侧Primer (Primer C2,Primer S2) 进行第二次PCR反应,可以高效特异性地扩增目的DNA[54].

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Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了 Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了,特异引物也重新设计了,还是不行, 用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计 什么是侧翼序列 什么是侧翼序列 侧翼序列包括什么 人类的结构基因主要由什么组成a、复制子、外显子、内含子b、侧翼序列、外显子、内含子c、编码序列、非编码序列d、单拷贝序列、编码序列、侧翼序列 人类的结构基因主要由下列组成（多选）a、复制子、外显子、内含子b、侧翼序列、外显子、内含子c、编码序列、非编码序列d、单拷贝序列、编码序列、侧翼序列 简述四种获得DNA和蛋白质序列的方法. DNA侧翼序列什么意思?生物学. 侧翼序列是否属于内含子? 请问在一段DNA序列中侧翼序列和UTR怎样区别 如何使用已知核苷酸序列在DNA和RNA上得到未知的侧翼序列 TAIL-PCR引物是如何结合到模板上的?以分离已知基因的启动子为例,TAIL-pcr 有三个嵌套特异引物结合到已知序列上也就是已知基因上,另外一个随机短引物结合到已知序列上游,如果这样的话就能 获得目的基因的方法有多种,以下获得目的基因的方法中,得到的基因与DNA中的实际碱基序列差异最大的是：A：利用PCR技术扩增目的基因B：从基因组文库中获得的目的基因C：从cDNA文库中获得 利用LM-PCR获得启动子用连接介导PCR克隆启动子,如何保证开始的限制酶切片段中就包含启动子序列? 在概念上,侧翼序列和基因的左右两臂有什么不同额, 侧翼序列包括顺式作用元件么?终止子和沉默子有什么不同?