利用LM-PCR获得启动子用连接介导PCR克隆启动子,如何保证开始的限制酶切片段中就包含启动子序列?
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/28 14:29:36
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利用LM-PCR获得启动子
用连接介导PCR克隆启动子,如何保证开始的限制酶切片段中就包含启动子序列?
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首先你对模板需要有足够的了解,你使用的限制性内切酶为电视不是在启动子附近时独有的;
然后你对启动子的大小是已知的,PCR产物经过电泳可以知道大致知道大小,经过比较,你能大概判断是否得到了正确的产物;
你还可以设计启动子内部特异的引物和,上下游引物中的一条进行PCR,如果有条带,说明你得到了正确的序列;或者你寻找内部独特的酶,进行酶切验证.
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