蓝白斑筛选问题!蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/18 21:32:34
蓝白斑筛选问题!蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么
蓝白斑筛选问题!
蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么它也不能降解X-gal,与重组子一样的啊,那么怎么保证筛选到的是重组子呢?难道感受态中没有质粒吗?如果没有制备感受态的步骤中怎么没有提到呢?晕死了!
蓝白斑筛选问题!蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么
在重组质粒表达的实验中,蓝白班筛选是要检测重组质粒是否表达,而氨苄的加入主要是为了防止培养过程中染菌.
对于半乳糖苷酶活性筛选,首先重组质粒所选的质粒与野生型（感受态）不同,上面有多克隆位点,蛋白标签,和多对操纵子、启动子,其中就包括乳糖操纵子.当培养液中加入IPTG,IPTG可以和乳糖操纵子下游的的阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白从DNA上脱离,激活半乳糖苷酶的表达.因而重组质粒可以利用x-gal而感受态不能.这个是蓝白斑筛选的主要原理.结果中白斑表示重组质粒表达的菌体,蓝斑表示未表达.
至于氨苄筛选,通常不会利用氨苄抗性进行筛选,因为感受态中是否有氨苄抗性基因很不确定,无法得到准确的结果.
感受态细胞中应该也有质粒，而且应该也有氨苄抗性标记，这句话不对。感受态细胞中有质粒，但是没有抗性。而作为载体的外源质粒是具有抗性位点的。
产生蓝白斑是针对外源质粒导入了感受态细胞之后而言的（只有导入了外源的质粒，该感受态才具有抗性，能够在含有氨苄的培养基上生存），导入的外源质粒有两种情况，一来是自身连接的，也就是没有插入目的片段，那个时候，编码半乳糖苷酶的基因重新连接到一起，具有活性，在I...
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感受态细胞中应该也有质粒，而且应该也有氨苄抗性标记，这句话不对。感受态细胞中有质粒，但是没有抗性。而作为载体的外源质粒是具有抗性位点的。
产生蓝白斑是针对外源质粒导入了感受态细胞之后而言的（只有导入了外源的质粒，该感受态才具有抗性，能够在含有氨苄的培养基上生存），导入的外源质粒有两种情况，一来是自身连接的，也就是没有插入目的片段，那个时候，编码半乳糖苷酶的基因重新连接到一起，具有活性，在IPTG的诱导下可以利用X-gal产生蓝斑。因此，凡是蓝斑的就代表被导入的是空的载体。
而外源质粒被插入目的片段之后，导致编码半乳糖苷酶的基因失效，无法利用X-gal产生蓝斑，因此菌落呈无色。
纯手打，望采纳，还有不理解，请追问。谢谢~
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