什么是免疫多聚酶链反应?其原理是什么?如题
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/27 21:19:35
什么是免疫多聚酶链反应?其原理是什么?如题
什么是免疫多聚酶链反应?其原理是什么?如题
什么是免疫多聚酶链反应?其原理是什么?如题
免疫聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）,又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique),是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法.PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法,主要由高温变性、 低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成：即在高温（95℃）下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新链.这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子.如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增,经过25～30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106～107倍.ＤＮＡ是由四种碱基按互补配对原则（即腺嘌呤Ａ对胸腺嘧啶Ｔ,鸟嘌呤Ｇ对胞嘧啶Ｃ）组成的螺旋双链.在细胞内,ＤＮＡ复制时,解螺旋酶首先解开双链让它变成单链做为模板,然后,另一种酶－－ＲＮＡ聚合酶合成一小段引物（ｐｒｉｍｅｒ）结合到ＤＮＡ模板上,最后,ＤＮＡ合成酶以这段引物为起点,合成与ＤＮＡ模板配对的新链.ＰＣＲ即是在体外模拟ＤＮＡ复制的过程,它用加热的办法让所研究的ＤＮＡ片段变性变成两条单链,人工合成两个引物让它们结合到ＤＮＡ模板的两端,ＤＮＡ聚合酶即可以大量复制该模板.假设扩增效率为“X”,循环数为“n”,则二者与扩增倍数“y”的关系式可表示为：y=(1 X)n.扩增30个循环即n=30时,若X=100%,则y=230=1073741824(>109)；而若X=80%时,则y=1.830=45517159.6(>107).由此可见,其扩增的倍数是巨大的,将扩增产物进行电泳,经溴化乙锭染色,在紫外灶照射下（254nm）一般都可见到DNA的特异扩增区带.