请问你做PCR之后出现弥散的带,现在解决了吗,怎么解决的?我用cDNA做模板,也出现这种情况.
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/16 18:09:59
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我也是用cDNA做模板的,没有出现过弥散带的情况,但经常出现非特异性条带.出现弥散带的原因可能是你在做凝胶电泳时电泳液被污染或者是做的胶有问题,也可能是你的cDNA部分降解了,至于降解的原因主要是由于时间和温度.扩增完的东西要立即进行电泳,其次电泳的室温不宜太高时间不要太长,一般最多半个小时左右.另外在扩增过程中,由于气候的缘故,部分PCR仪在室温超过30度后就不能正常工作了,这要看PCR仪的型号,其次是前期的RNA提取的效果不好,或者是提取的RNA已经出现降解导致cDNA模板质量受到影响.
最后要说一下关于PCR部分,PCR的体系和退火温度很重要,特别是镁离子的浓度,最好是用正交试验摸索出最好的体系,然后用温度梯度找到最适合的退火温度.因为设计的好不好也是重大问题之一啊,你先试试看吧!
换一对引物
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请问你的PCR问题后来怎么解决的PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从头拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一
【求助/交流】PCR得弥散带是怎么回事
我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?
请问若因为非特异扩增导致PCR产物弥散,理论上弥散带里是否应该包含目的条带?谢谢TT-TTPCR产物电泳弥散,因为退火温度为55,所以初步考虑是退火过低导致的非特异扩增.但小女子有一疑问,我的
实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决:1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少.
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现很多弥散的条带是PCR的原因还是电泳的原因呢?
二次PCR的产物电泳图观察,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,
PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么前几次做的结果都挺好的,条带很清楚,亮度也可以,就是不太齐,但是最近几次几乎没有目的带,都是弥散的,从头到尾,我用的东西都是一样的,条件也没变
做PCR扩增时,总是出现一条大于100bp的杂带,个别带强度甚至强于目标带.请问是怎么回事,比如我扩500bp 的带时,总在600bp 左右出现一个杂带,而扩600时,又在700左右出现一个杂带,虽然弱一点,但仍
做幻灯片中如何使一段文字消失的同时出现另一段文字?例如以下画面:“1、弥散的定义”“2、弥散的表现方式”a、单纯弥散;b、梯度弥散;c、复合弥散“3、弥散的条件在幻灯演示过程中
什么是DNA的弥散带现象
PCR出现大分量弥散条带?电泳RNA时无DNA条带.可能是什么原因?
荧光PCR时ct值大于30?现在在做荧光pcr,细胞的,12孔板,但是进行扩增时发现ct值大于30,一般在35左右,之后将循环数设置为60,才能见到完美的曲线,请教大家分析下出现的原因,附上溶解曲线和扩增
为什么我做定量PCR无CT值(信号)出现?怎么解决呢
PCR结果呈弥散状是什么原因造成的我上个星期跑完PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都
菌落PCR有带,可提取的质粒没带!请问我转化的单菌落做菌落PCR有带,单相对应的菌落提取质粒P不出带是什么原因呀?引物是特异性的!
如何消除PCR的拖尾PCR扩增出来有目的条带,但是有拖尾,呈弥散片