如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个大小只差50bp左右的片段?在做双酶切,想回收目的片断.目的片断2776bp,载体2710bp,双酶切后60V,1.0%琼脂糖凝胶跑了90min分不开,可以看见3000bp以下很亮的一条带.请
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/24 10:08:06
如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个大小只差50bp左右的片段?在做双酶切,想回收目的片断.目的片断2776bp,载体2710bp,双酶切后60V,1.0%琼脂糖凝胶跑了90min分不开,可以看见3000bp以下很亮的一条带.请
如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个大小只差50bp左右的片段?
在做双酶切,想回收目的片断.目的片断2776bp,载体2710bp,双酶切后60V,1.0%琼脂糖凝胶跑了90min分不开,可以看见3000bp以下很亮的一条带.请高手指点如何分开大小这么相近的片段.
如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个大小只差50bp左右的片段?在做双酶切,想回收目的片断.目的片断2776bp,载体2710bp,双酶切后60V,1.0%琼脂糖凝胶跑了90min分不开,可以看见3000bp以下很亮的一条带.请
这两个片段太接近了,通过琼脂糖胶很难分开.建议再用一个载体上有的酶,而目的片段上没有的酶来切一下,也就是做个三酶切,这样载体片段就被切断了.
条带分开的程度看你实验的需求。如果你的Marker相邻两个条带相差100bp，而一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
本人感觉通过琼脂糖凝胶电泳来区分50bp的片段，难度很大。除非采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，但是此操作太繁琐。我建议你可以这样做：目的片段和载体的序列应该都是知道的，在这种情况下，你找出两者存在的不同的酶切位点，并进行酶切，这样你的载体的部分序列将会被切开，相应的片段也就会大大缩短，这样就可以将目的片段和载体区分开了
只是建议，祝实验顺利...
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本人感觉通过琼脂糖凝胶电泳来区分50bp的片段，难度很大。除非采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，但是此操作太繁琐。我建议你可以这样做：目的片段和载体的序列应该都是知道的，在这种情况下，你找出两者存在的不同的酶切位点，并进行酶切，这样你的载体的部分序列将会被切开，相应的片段也就会大大缩短，这样就可以将目的片段和载体区分开了
只是建议，祝实验顺利
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