如何用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段大小?其根据是什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/16 23:33:56
如何用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段大小?其根据是什么?
如何用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段大小?其根据是什么?
如何用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段大小?其根据是什么?
步骤:
1.制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.
2.胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加 1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.
3.加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).
4.电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.
5.电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.
6.观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存.
原理:
借助琼脂糖凝胶的分子筛作用,核酸片段因其分子量或分子形状不同,电泳移动速度有差异而分离.
简单点说的话就是：琼脂糖凝胶电泳是借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，DNA片段本身带电，因其分子量或分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离。不同大小的片段前进速度和标准品中同样大小片段一样，所以所测片段与标准品的位置的对照可以判断它的大小。...
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简单点说的话就是：琼脂糖凝胶电泳是借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，DNA片段本身带电，因其分子量或分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离。不同大小的片段前进速度和标准品中同样大小片段一样，所以所测片段与标准品的位置的对照可以判断它的大小。
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