我在扩一基因的全长,设计的一对特异引物退火温度一个47度,一个64度,我该怎么确定退火温度?

我在扩一基因的全长,设计的一对特异引物退火温度一个47度,一个64度,我该怎么确定退火温度? 设计实时定量PCR引物是根据基因的全长设计引物还是根据基因的开放阅读框设计引物? 设计引物如何保证基因完整PCR的产物只是基因的一部分啊,如何设计一对引物保证基因完整. 设计引物目的基因前延后延我设计引物,后期做表达.想要把目的基因前加500bp及后加500bp现在的问题是,我在查结核杆菌全长时发现两个连续的基因之间有一些bp的间隔现在的问题是,我是按基因 已经知道一段基因的CDS,我要扩全长,请问怎么设计引物呢?是不是在两端各取20几个bp就可以了呢》?不考虑CG 二聚体一类的话. 关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗?在基因诊断时,已知致病基因序列设计的引物也能同时扩增正常人该段基因吗.比如镰状细 特异引物PCR问题各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只有引物二聚体,没有任何扩增条带,我也试着在引物报告单上所给 如何查基因引物的特异性,就是看我们的引物是不是对这个基因特异的,还是否存在于别的基因上? 如何查Genebank已经公布的植物rbcL基因序列?然后如何通过这个设计一对引物呢? 已知到某一基因的部分序列想要设计引物继续扩序列,选取哪一块设计引物 一条非全长基因序列荧光定量pcr引物如何微调（指用primer或primerselect设计出的引物总是不太好） 关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗在基因诊断时,比如镰状细胞贫血是点突变,患者和正常人在突变点两侧的基因是一样的,那 PCR引物blast结果,如图 12处是我的目的基因 可是还出来结果三，是不是PCR的结果就会出现非特异条带？我是不是应该考虑换引物啊？ 我想扩增某一目的基因,请问引物一定要在起始密码子和终止密码子周围设计吗?我可不可以在起始密码子前面的一段序列中设计引物?我以前是这样设计的,但是一直都扩不出来,怎么办? 关于引物设计要对目的基因进行定量分析,基因全长1932NT,是不是只要选择其中的一段就行了,长约400NT左右,那么这一段应如何选?该基因的保守序列吗?该怎么确定一段基因是否是保守序列?我在G 设计引物的时候为什么先设计一对引物,再加上酶切位点后设计一对,为什么不直接加上酶切位点设计引物呢? 反转录特异引物的选择小白提问,求师哥师姐帮忙： 我提取了昆虫的RNA ,反转录过程中用的是自己设计的特异引物,请问 F和R（引物）都要加吗?还是只加一个就可以.谢谢 如何设计巢氏PCR的第一对引物