如何设计巢氏PCR的第一对引物

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/22 10:51:47
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如何设计巢氏PCR的第一对引物
如何设计巢氏PCR的第一对引物

如何设计巢氏PCR的第一对引物
可以使用primer5 或者primerdesign设计 还是主要考虑发夹结构,GC含量,Tm值和引物交叉,还有减少引物二聚体的产生.
如果是扩增启动子的话,建议选择引物的长度30-35bp,一般试剂盒里有接头引物的,只要在下游已知序列设计引物就可以咯

看了下一楼的.外引物的设计似乎跟普通PCR没有不同。但是为了确保外引物的扩增子内部有合适的位点给内引物，貌似还是先设计内引物较为恰当。

巢式PCR（nested PCR），是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。
在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。
由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。
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巢式PCR（nested PCR），是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。
在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。
由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。
一般应用于动物方面。如：病毒，梅毒螺旋体，HIV，肿瘤基因等
巢式PCR，可以在10的六次方基因组背景下检测到一个拷贝的病毒基因，也不像二次PCR容易产生成片的产物，是效果最好的PCR，但也因此是最容易污染的PCR

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