平末端连接问题最近在做载体构建,有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上,两端都是平末端,始终连不上,不知道连接体系需要怎样的优化,连接酶要多,但是一个10ul的体系中,到底

平末端连接问题最近在做载体构建,有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上,两端都是平末端,始终连不上,不知道连接体系需要怎样的优化,连接酶要多,但是一个10ul的体系中,到底 基因工程方面的问题我现在有一段基因,全长是427bp,是平末端,但是我想在它上面加上酶切位点,也就是说转化成粘性末端,比如加上ecol 1和hind 3 ,因为我要和带有这连个酶切位点的载体连接,我该 一个平末端和粘性末端怎样连接比较好 转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体? 表达载体构建的问题.我要用PBI121做表达载体,用他上面的35S做启动子,那么我的插入目的基因的启动子是不是要和表达载体上的启动子在一个编码区,设计引物时要怎么设计才能让PBI121上的启动 构建载体要注意哪些问题? T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 平末端如何连接 基因工程在构建表达载体时必须用同一种限制酶,还是可以用不同的限制酶,只要得到的黏性末端相同就行了? 关于载体构建的问题我要构建一个GFP表达载体标记人体骨髓间充质干细胞的黏着斑,我想问一下这个载体的目的基因怎么获得?质粒载体用哪种比较好? 基因表达载体在体外构建么? 基因工程中的碱基互补配对目的基因被限制性内切酶切为平末端后,构建载体时,是否进行碱基互补配对? 单克隆菌落就一定是单基因型吗?有个问题困扰我好久了,最近构建了一个工程菌,是将野生型菌株的一个启动子片段,连入T载体,再用同源重组的方法整合进野生型菌株基因组上的另一个位置,然 采用慢病毒载体构建shRNA载体有什么优势? 有没有机构可以代做实验,设计EGFP融合表达载体构建的相关序列? 不用IPTG诱导的重组蛋白能在BL21中表达吗,如果表达经SDS-PAGE电泳后能看到条带吗,.我最近在做重组蛋白的表达,我构建好了一个重组载体,启动子是不用IPTG诱导表达的,我跑了两次电泳结果都没 一个可以在E.coli DH-5中表达蛋白质的载体应该包括哪些必需部分?我感觉这题就是问以原核细胞为宿主的,基因工程的载体应该怎样构建.或者其载体的结构是什么.最好有图展示. 构建的质粒,菌液PCR正确,质粒电泳却什么都没有,是怎么回事?我要将一个片段连接到载体上,片段长度：2588bp,载体：2686bp,是平末端链接,4度过夜,然后转化DH5a,蓝白筛选,用菌液PCR验证,引物用的