T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/25 12:29:31
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T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到
T载体连接问题
现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到大肠杆菌中挑斑验证时用同样的嵌套引物去验证却没有扩增出条带,请问这是为什么啊?

T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到
分析原因可能有:
1、T载体连接有问题,重新调整目的片段和T载体的比例,重新连接.
2、PCR某种试剂出问题了,以前有个师姐就是这样,怎么也扩不出来,让别人带样扩出来了,原来是Taq 酶出问题了,你也可以确定一下.

可能目的片段两边没有加A,连不上T载体吧

T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来回收的片段1K左右 是否目的基因在PCR扩增时不用在引物中加入酶切位点,就可与pGEM-T载体连接?为什么? 为什么构建克隆载体不需T4连接酶为什么PCR扩增出的DNA片段和克隆载体pMD 18-T连接不需T4连接酶,而和表达载体连接就需要T4连接酶. 关于CDNA文库的问题求解释以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞 能不能用PCR直接扩增目的片段,然后转入表达载体,代替在克隆载体或dh5a中的扩增 有现成的质粒,无原始的菌种或菌液,如何对质粒进行扩增?目的基因先后连接到T载体和表达载体之后,接种到培养液中,培养液在摇床上培养12-16h后提取的质粒.现在质粒快用完了,但是目的基因 平末端连接问题最近在做载体构建,有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上,两端都是平末端,始终连不上,不知道连接体系需要怎样的优化,连接酶要多,但是一个10ul的体系中,到底 如何克服载体自身连接的问题? 转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带(即之前的连接产物,约3k 在PCR产物基础上如何设计RACE引物,其原理是怎样的?我未做过RACE.看了你对“未知基因扩增”的回答,觉得你是个专家.也许我没说清楚。按某同源基因的保守序列扩增好了基因的内部连段,然后 双酶切鉴定(或者测序)是否含有目的基因的时候,为何用pMD18-T载体?过程主要是:从小麦胚胚芽鞘中提出总的RNA,反转录cDNA,然后纯化cDNA,特异性PCR扩增,电泳,得到目的基因,然后连接载体pMD18-T 连接前加错了酶切的载体怎么办?我是个新手,做实验的时候在连接转化前,加入载体加错了,应该加NdeI-HindIII酶切的PET-28a,我加成了NdeI-XholI酶切的PET-28a~现在涂板已经长出来了但是不对吧~怎么办 各位高手请问一下Burkholderia菌是属于细菌,我可以用3'RACE方法扩增其全基因序列吗?引物怎么设计谢谢你的回答,不过我现在做的是Burkholderia产的脂肪酶的全基因扩增,通过酶的分离纯化后得到N 找双酶切位点有哪些原则?我的目的片段连载PMD18-T载体上,现在想做双酶切,再和绿色荧光蛋白的载体连接起来做表达,已经确认一个酶EcorI,另一个酶不知道该选哪一个?不知道这其中有什么要注 博凌科为的pSURE -T Simple 载体连接试剂盒如何? t载体连接产物4度可以保存3天吗 pGEMX -T Easy 载体连接试剂盒 哪家的好?