大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/26 09:18:39
大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的
大片段的RT-PCR
现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的引物是经过特异性分析的,应该没什么问题,不过现在连摸索引物的Tm都无法进行.
大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的
博凌科为-为你Takara LA Taq酶,体系同说明书.反应程序是：（要求引物Tm值在70度左右,但上下只能浮动2度.Primer 5计算） No.of Cycles Temperature (℃) Duration 1 94 3 min 5 94 30 sec 72 3 min 5 94 30 sec 70 30 sec 72 3 min 25 94 30 sec 68 30 sec 72 3 min 1 72 5 min 1 4 10 min
北京德元国际科技可以做RT-PCR,代做就可以了
不知道你要用来做什么，简单知道的说一下
1. 5.5kb的产物长度正常的TAQ都可以扩增，延伸时间加长，一般的来说1.5 kb 1 分钟，其实不止，你可以试试计算一下，或者看看你使用的酶的说明书，我们这里的酶是自己实验室做的，所以都是经验之谈。
2 实在不行，你可以用一下LA酶 说明书上有操作方法，我用LA扩增10kb的东西，没问题，就是载体不好连接，多试试。
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不知道你要用来做什么，简单知道的说一下
1. 5.5kb的产物长度正常的TAQ都可以扩增，延伸时间加长，一般的来说1.5 kb 1 分钟，其实不止，你可以试试计算一下，或者看看你使用的酶的说明书，我们这里的酶是自己实验室做的，所以都是经验之谈。
2 实在不行，你可以用一下LA酶 说明书上有操作方法，我用LA扩增10kb的东西，没问题，就是载体不好连接，多试试。
3 T基本上能满足你连接测序的要求了。
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