怎样从猪血中提取SOD?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/20 05:05:32
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怎样从猪血中提取SOD?
怎样从猪血中提取SOD?
怎样从猪血中提取SOD?
这个复杂了,给你个专家的回答吧,有条件可以试试
用动物血(猪、牛、羊等)生产生化制品是对畜禽屠宰下脚料进行深加工的方法之一,如生产SOD(超氧化物歧化酶).但在基层单位不宜开展这项工作.
从猪血中提取SOD方法和步骤
（1）分离血球
取新鲜猪血,加入到3.8%柠檬酸三钠抗凝液中,新鲜猪血与抗凝液的比例为3：1,轻轻搅拌均匀,4 000r/min离心20min,收集红血球.
（2）除血红蛋白
红血球用3倍体积生理盐水洗涤,4 000r/min离心20min,重复三次,然后向洗净的红血球加入1～1.1倍体积去离子水,搅拌溶血30min,再向溶血液中分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿,剧烈搅拌15min左右,静置1h,然后4 000r/min离心20min除去变性血红蛋白沉淀,取清液,过滤,收集滤液（记录体积,测酶活性和蛋白浓度）.
（3）热变性
上清液加热到65℃,保温10min,然后迅速冷却到室温,3 000r/min离心20min,弃去沉淀物,收集上清液（记录体积,测酶活性和蛋白浓度）.
（4）沉淀
清液在盐冰浴中冷却,然后在-5℃以下的操作温度下,加入1.5倍量预冷丙酮,边加边搅拌均匀,即有白色沉淀产生,静置2～3min,迅速抽滤,弃去滤液得肉色沉淀.沉淀物用少量蒸馏水溶解,4 000r/min离心20min,除去不溶物,用pH7.6的2.5mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液透析,即得粗SOD溶液（记录体积,测酶活性和蛋白浓度）.