我的重组质粒想转到纳豆枯草芽孢杆菌里,但是一直转不进去,是不是纳豆纳豆枯草芽孢杆菌里有个修饰限制系统呀?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 10:44:04
我的重组质粒想转到纳豆枯草芽孢杆菌里,但是一直转不进去,是不是纳豆纳豆枯草芽孢杆菌里有个修饰限制系统呀?
我的重组质粒想转到纳豆枯草芽孢杆菌里,但是一直转不进去,
是不是纳豆纳豆枯草芽孢杆菌里有个修饰限制系统呀?
我的重组质粒想转到纳豆枯草芽孢杆菌里,但是一直转不进去,是不是纳豆纳豆枯草芽孢杆菌里有个修饰限制系统呀?
转枯草建议还是电转,化学法不是说一定不行,效率太低,而且受限太多.
这是我们lab的protocol,你试试.
1）接种B . subtilis于3mlLB培养基中,过夜培养..
2）取2.6ml过夜培养物接入40ml（LB+0.5M 山梨醇）中,37℃,200rpm培养至OD600=0.8左右.
3）将菌液冰水浴10 min,然后5000g,5 min,4℃离心收集菌体.
4）用50ml预冷的电转培养基（0.5M山梨醇,0.5M甘露醇,10%葡萄糖）,重新吹悬菌体,5000g,5min,4℃离心去上清,如此漂洗4－5次.
5）将洗涤后的菌体吹悬于1ml电转培养基中,每管分装150ul.
6）将60μl感受态细胞中加入50ngDNA,冰水孵育2min,加入预冷的电转杯（1mm）中,电击一次.电转仪设置：2.0kv,1mm,电击1次.
7）电击完毕立即加入1ml 复苏培养基（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇）,37℃,200rpm,复苏3h后,涂板.37℃,过夜培养.
一楼的完全是在瞎说。
用电击的方法就可以了，或者用
糖化多聚赖氨酸导向配体具有良好的导入重组质粒进入肝细胞的功能,且更适合于应用.
你可以考虑下感受态，重新做下感受态试试，可能是感受态保存不好，失效了
某些人觉得转化时感受态细胞的制备最重要，可能是决定转化效率的关键步骤
------------
知识多就知识多呗，学历高就学历高呗，语言上也注意点，好像很牛的样子了。搞的人这么不爽干啥！！...
全部展开
你可以考虑下感受态，重新做下感受态试试，可能是感受态保存不好，失效了
某些人觉得转化时感受态细胞的制备最重要，可能是决定转化效率的关键步骤
------------
知识多就知识多呗，学历高就学历高呗，语言上也注意点，好像很牛的样子了。搞的人这么不爽干啥！！
收起