通过设计带酶切位点的PCR引物来使目的片段添加限制性酶切位点的原理是什么?百思不得其解,我的意思是说引物人为添加上的酶切位点与要扩增的片段也不匹配,怎么能随着引物克隆到目的片
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/21 00:29:27
通过设计带酶切位点的PCR引物来使目的片段添加限制性酶切位点的原理是什么?百思不得其解,我的意思是说引物人为添加上的酶切位点与要扩增的片段也不匹配,怎么能随着引物克隆到目的片
通过设计带酶切位点的PCR引物来使目的片段添加限制性酶切位点的原理是什么?百思不得其解,
我的意思是说引物人为添加上的酶切位点与要扩增的片段也不匹配,怎么能随着引物克隆到目的片段上,而使目的片段带上酶切位点的序列呢?原理是什么呢?
通过设计带酶切位点的PCR引物来使目的片段添加限制性酶切位点的原理是什么?百思不得其解,我的意思是说引物人为添加上的酶切位点与要扩增的片段也不匹配,怎么能随着引物克隆到目的片
不是随意添加.酶切位点都加在引物的5‘端.这样在第一轮扩增后,就会产生有酶切位点的产物了(酶切位点在产物的两端）.在接下来的扩增中每个产物就都会有了.PCR的时候可以耐受引物的5‘端由数个不匹配的碱基对.但是随着扩增的进行,产物都有这些位点后,就不存在不匹配的问题了
我要知道就好了
大哥 我也没想清楚，要是你知道了，跟我也说声 什么原理啊？
原理很简单，因为PCR扩增出来的产物都是你加进去的引物延伸出来的，所以PCR产物上都带你加进去的酶切位点。Btw：虽然你觉得你加进去的引物量很少，但是你可以算一下，你加进去了多少mol的引物，再用这个量乘以你的PCR目的产物的分子量，就可以知道你理论上能等到的产物的量了。所以一般pcr反应体系里加入的引物的量都是过量的。...
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原理很简单，因为PCR扩增出来的产物都是你加进去的引物延伸出来的，所以PCR产物上都带你加进去的酶切位点。Btw：虽然你觉得你加进去的引物量很少，但是你可以算一下，你加进去了多少mol的引物，再用这个量乘以你的PCR目的产物的分子量，就可以知道你理论上能等到的产物的量了。所以一般pcr反应体系里加入的引物的量都是过量的。
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