DEAE 层析原理是什么?分离蛋白的时候
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/08 00:07:43
DEAE 层析原理是什么?分离蛋白的时候
DEAE 层析原理是什么?
分离蛋白的时候
DEAE 层析原理是什么?分离蛋白的时候
给你找了以前的文章,你可以看一下.如下.
层析技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相,以蛋白质等样品为移动相,分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素、多糖等的一项技术.
在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团,当结合阳离子基团时,可换出阴离子,则称为阴离子交换剂.如二乙氨乙基(Dicthylaminoethyl,DEAE)纤维素.在纤维素上结合了DEAE,含有带正电荷的阳离子纤维素—O—C6 H14N+H,它的反离子为阴离子(如Cl-等),可与带负电荷的蛋白质阴离子进行交换.当结合阴离子基团时,可置换阳离子,称为阳离子交换剂,如羧甲基(Carboxymethy,CM)纤维素.纤维素分子上带有负电荷的阴离子(纤维素－O－CH2－COO一),其反离子为阳离子(如Na+等),可与带正电荷蛋白质阳离子进行交换.
溶液的pH值与蛋白质等电点相同时,静电荷为0,当溶液pH值大于蛋白质等电点时,则羧基游离,蛋白质带负电荷.反之,溶液的pH值小于蛋白质等电点时,则氨基电离,蛋白质带正电荷.溶液的pH值距蛋白质等电点越远,蛋白质的电荷越多.反之则越少.血清蛋白质均带负电荷,但各种蛋白质带负电荷的程度有所差异,以白蛋白为最多,依次为 球蛋白,球蛋白和 球蛋白.
在适当的盐浓度下,溶液的pH值高于等电点时,蛋白质被阴离子交换剂所吸附；当溶液的pH值低于等电点时,蛋白质被阳离子交换剂所吸附.由于各种蛋白质所带的电荷不同.它们与交换剂的结合程度也不同,只要溶液pH值发生改变,就会直接影响到蛋白质与交换剂的吸附,从而可能把不同的蛋白质逐个分离开来.
交换剂对胶体离子(如蛋白质)和无机盐离子(如NaCl)都具有交换吸附的能力,当两者同时存在于一个层析过程中,则产生竞争性的交换吸附.当Cl一的浓度大时,蛋白质不容易被吸附,吸附后也易于被洗脱,当Cl一浓度小时,蛋白质易被吸附,吸附后也不容易被洗脱.因此,在离子交换层析中,一般采用两种方法达到分离蛋白质的目的.一种是增加洗脱液的离子强度,一种是改变洗脱液的pH值.pH值增高时,抑制蛋白质阳离子化,随之对阳离子交换剂的吸附力减弱.pH值降低时,抑制蛋白质阴离子化,随之降低了蛋白质对阴离子交换剂的吸附.当使用阴离子交换剂时,增加盐离子,则降低pH值.当使用阳离子交换剂时,增加盐离子浓度,则升高溶液pH值.