关于食品中苯并(a)芘的测定方法

关于食品中苯并(a)芘的测定方法
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关于食品中苯并(a)芘的测定方法
楼主你好： 食品中苯并(a)芘的测定方法 食品中苯并(a)芘的测定方法 GB/T 5009.27—1996 1主题内容与适用范围 本标准规定了食品中苯并(a)芘的测定方法.本标准适用于食品中苯并(a)芘的测定. 样品量为50g,点样量为1g时,方法最低检出浓度为1ng/g. 2原理样品先用有机溶剂提取,或经皂化后提取,再将提取液经液－液分配或色谱柱净化,然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘,因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点,将分离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下,用溶剂浸出后,用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量. 3试剂 3.1苯：重蒸馏. 3.2环己烷(或石油醚,沸程30～60℃)：重蒸馏或经氧化铝柱处理无荧光. 3.3二甲基甲酰胺或二甲基亚砜. 3.4无水乙醇：重蒸馏. 3.5乙醇(95%). 3.6氢氧化钾. 3.7丙酮：重蒸馏. 3.8石油醚(60～90℃)：重蒸. 3.9甲酸(88%～90%). 3.10无水硫酸钠：120℃烤2h以上. 3.11咖啡因甲酸溶液(150g/L)：称咖啡因(医用或试剂用)15g,溶于适量甲酸中,再稀释至100mL. 3.12甲酸(40%). 3.13硫酸钠溶液(20g/L). 3.14脱脂棉：用二氯甲烷回流4h以上. 3.15展开剂：乙醇(95%)－二氯甲烷(2∶1). 3.16硅镁型吸附剂：将60～100目筛孔的硅镁吸附剂经水洗四次(每次用水量为吸附剂质量的4倍)于垂融漏斗上抽滤干后,再以等量的甲醇洗(甲醇与吸附剂量克数相等),抽滤干后,吸附剂铺于干净瓷盘上,在130℃干燥5h后,装瓶贮存于干燥器内,临用前每100g加5g水减活,混匀并平衡4h以上,最好放置过夜. 3.17层析用氧化铝(中性)：120℃活化4h. 3.18乙酰化滤纸：将中速层析用滤纸裁成30cm×4cm的条状,逐条放入盛有乙酰化混合液(180mL苯、130mL乙酸酐、0.1mL硫酸) 的500mL烧杯中,使滤纸充分地接触溶液,保持溶液温度在21℃以上,时时搅拌,反应6h,再放置过夜.取出滤纸条,在通风橱内吹干,再放入无水乙醇中浸泡4h,取出后放在垫有滤纸的干净白瓷盘上,在室温内风干压平备用,一次可处理滤纸15～18条.3.19苯并(a)芘标准溶液：精密称取10.0mg苯并(a)芘,用苯溶解后移入100mL棕色容量瓶中,并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于苯并 (a)芘100g.放置冰箱中保存. 3.20苯并(a)芘标准使用液：吸取1.00mL苯并(a)芘标准溶液置于10mL容量瓶中,用苯稀释至刻度,同法依次用苯稀释,最后配成每毫升相当于1.0及0.1?g苯并(a)芘两种标准使用液,放置冰箱中保存. 4仪器 4.1脂肪提取器. 4.2层析柱：10～15mm,长350mm,上端有内径25mm,长80～100mm内径漏斗,下端具有活塞. 4.3层析缸(筒). 4.4K－D全玻璃浓缩器. 4.5紫外光灯：带有波长为365nm或254nm的滤光片. 4.6回流皂化装置：锥形瓶磨口处连接冷凝管. 4.7组织捣碎机. 4.8振荡器：装有自制木架,每次可摇6个分液漏斗. 4.9微量注射器：25L、50L. 4.10荧光分光光度计. 5分析步骤 5.1荧光分光光度法5.1.1样品提取5.1.1.1粮食或水分少的食品：称取40.0～60.0g粉碎过筛的样品,装入滤纸筒内,用70mL环己烷润湿样品,接收瓶内装6～8g氢氧化钾、100mL乙醇(95%)及60～80mL环己烷,然后将脂肪提取器接好,于90℃水浴上回流提取6～8h,将皂化液趁热倒入500mL分液漏斗中,并将滤纸筒中的环己烷也从支管中倒入分液漏斗,用50mL乙醇(95%)分二次洗接收瓶,将洗液合并于分液漏斗.加入100mL水,振摇提取3min,静置分层(约需20min),下层液放入第二分液漏斗,再用70mL环己烷振摇提取一次,待分层后弃去下层液,将环己烷层合并于第一分液漏斗中,并用 6～8mL环己烷淋洗第二分液漏斗,洗液合并.用水洗涤合并后的环己烷提取液三次,每次100mL,三次水洗液合并于原来的第二分液漏斗中,用环己烷提取二次,每次30mL,振摇0.5min,分层后弃去水层液,收集环己烷液并入第一分液漏斗中,于50～60℃水浴上,减压浓缩至40mL,加适量无水硫酸钠脱水. 5.1.1.2油脂5.1.1.2.1植物油：称取20.0～25.0g的混匀油样,用100mL环己烷分次洗入250mL分液漏斗中,以环己烷饱和过的二甲基甲酰胺提取三次,每次40mL,振摇1min,合并二甲基甲酰胺提取液,用40mL经二甲基甲酰胺饱和过的环己烷提取一次,弃去环己烷液层.二甲基甲酰胺提取液合并于预先装有240mL硫酸钠溶液(20g/L)的500mL分液漏斗中,混匀,静置数分钟后,用环己烷提取二次,每次100mL,振摇3min,环己烷提取液合并于第一个500mL分液漏斗.也可用二甲基亚砜代替二甲基甲酰胺.用40～50℃温水洗涤环己烷提取液二次,每次100mL,振摇0.5min,分层后弃去水层液,收集环己烷层,于50～60℃水浴上减压浓缩至 40mL.加适量无水硫酸钠脱水. 5.1.1.2.2甲酸－咖啡因净化提取法(适用于油脂) 称取混匀油样10.00g,用90mL石油醚分数次转入100mL分液漏斗中,用甲酸提取三次,每次10mL,于振荡器上振摇2min,静置分层,弃去下层甲酸.石油醚层以咖啡因－甲酸溶液(150g/L)萃取三次,每次10mL,振摇3min,静置分层,待彻底澄清后,仔细将咖啡因提取液(注意切勿带入醚层或乳化层)转入300mL具塞锥形瓶中,加120mL硫酸钠溶液(20g/L)稀释,加50mL石油醚猛烈振摇4min,转入250mL分液漏斗中,静置分层,下层再转入原锥形瓶中,加50mL石油醚重提一次,合并两次石油醚提取液,加20mL甲酸(40%),摇1min,弃去甲酸水溶液(除去残留的咖啡因),将石油醚提取液通过无水硫酸钠(约35g)的漏斗,脱水,转入K－D浓缩器中,减压浓缩至近干,以少量环己烷冲洗导管,混匀,吹氮(或室温挥发)定容至0.2mL,密塞、避光、冷藏保存,备用. 本法无需再过柱净化,以下按5.1.3操作.5.1.1.3鱼、肉及其制品：称取50.0～60.0g切碎混匀的样品,再用无水硫酸钠搅拌(样品与无水硫酸钠的比例为1∶1或1∶2,如水分过多则需在60℃左右先将样品烘干),装入滤纸筒内,然后将脂肪提取器接好,加入100mL环己烷于90℃水浴上回流提取6～8h,然后将提取液倒入 250mL分液漏斗中,再用6～8mL环己烷淋洗滤纸筒,洗液合并于250mL分液漏斗中,以下按5.1.1.2自“以环己烷饱和过的二甲基甲酰胺提取三次”起依法操作. 5.1.1.4蔬菜：称取100.0g洗净、晾干的可食部分的蔬菜,切碎放入组织捣碎机内,加150mL丙酮,捣碎2min.在小漏斗上加少许脱脂棉过滤,滤液移入500mL分液漏斗中,残渣用50mL丙酮分数次洗涤,洗液与滤液合并,加100mL水和100mL环己烷,振摇提取2min,静置分层,环己烷层转入另一500mL分液漏斗中,水层再用100mL环己烷分二次提取,环己烷提取液合并于第一个分液漏斗中,再用250mL水,分二次振摇、洗涤,收集环己烷于50～60℃水浴上减压浓缩至25mL,加适量无水硫酸钠脱水.5.1.1.5饮料(如含二氧化碳先在温水浴上加温除去)：吸取50.0～100.0mL样品于500mL分液漏斗中,加2g氯化钠溶解,加 50mL环己烷振摇1min,静置分层,水层分于第二个分液漏斗中,再用50mL环己烷提取一次,合并环己烷提取液,每次用100mL水振摇、洗涤二次,收集环己烷于50～60℃水浴上减压浓缩至25mL,加适量无水硫酸钠脱水.更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考国家标准物质标准微粒标准物质 http://www.rmhot.com/plist_1/plist_1_16_0_1.html 5.1.1.6糕点类：称取50.0～60.0g磨碎样品,装于滤纸筒内,以下按5.1.1.1自“用70mL环己烷湿润样品”起依法操作.在5.1.1.1、5.1.1.3～5.1.1.6各项操作中,均可用石油醚代替环己烷,但需将石油醚提取液蒸发至近干,残渣用25mL环己烷溶解.5.1.2净化5.1.2.1于层析柱下端填入少许玻璃棉,先装入5～6cm的氧化铝,轻轻敲管壁使氧化铝层填实、无空隙,顶面平齐,再同样装入5～6cm的硅镁型吸附剂,上面再装入5～6cm无水硫酸钠,用30mL环己烷淋洗装好的层析柱,待环己烷液面流下至无水硫酸钠层时关闭活塞.5.1.2.2将样品环己烷提取液倒入层析柱中,打开活塞,调节流速为每分钟1mL,必要时可用适当方法加压,待环己烷液面下降至无水硫酸钠层时,用30mL苯洗脱,此时应在紫外光灯下观察,以蓝紫色荧光物质完全从氧化铝层洗下为止,如30mL苯不足时,可适当增加苯量.收集苯液于50～60℃水浴上减压浓缩至0.1～0.5mL〔可根据样品中苯并(a)芘含量而定,应注意不可蒸干〕. 5.1.3分离5.1.3.1在乙酰化滤纸条上的一端5cm处,用铅笔划一横线为起始线,吸取一定量净化后的浓缩液,点于滤纸条上,用电吹风从纸条背面吹冷风,使溶剂挥散,同时点20?L苯并(a)芘的标准使用液(1g/mL),点样时斑点的直径不超过3mm,层析缸(筒)内盛有展开剂,滤纸条下端浸入展开剂约 1cm,待溶剂前沿至约20cm时取出阴干.5.1.3.2在365或254nm紫外光灯下观察展开后的滤纸条,用铅笔划出标准苯并(a)芘及与其同一位置的样品的蓝紫色斑点,剪下此斑点分别放入小比色管中,各加4mL苯加盖,插入50～60℃水浴中不时振摇,浸泡15min. 5.1.4测定5.1.4.1将样品及标准斑点的苯浸出液移入荧光分光光度计的石英杯中,以365nm为激发光波长,以365～460nm波长进行荧光扫描,所得荧光光谱与标准苯并(a)芘的荧光光谱比较定性. 5.1.4.2与样品分析的同时做试剂空白,包括处理样品所用的全部试剂同样操作,分别读取样品、标准及试剂空白于波长406、406＋5、406 －5nm处的荧光强度,按基线法由式(1)计算所得的数值,为定量计算的荧光强度.5.1.5计算 式中：X1——样品中苯并(a)芘的含量,g/kg； m1——苯并(a)芘标准斑点的质量,g；F——标准的斑点浸出液荧光强度,mm； F1——样品斑点浸出液荧光强度,mm； F2——试剂空白浸出液荧光强度,mm；V1——样品浓缩液体积,mL； V2——点样体积,mL； m2——样品质量,g. 结果的表述：报告测定结果至小数一位.5.1.6允许差 相对相差≤20%. 5.2目测法 5.2.1测定吸取5,10,15,20或50?L样品浓缩液［可根据样品中苯并(a)芘含量而定］10,20L及苯并(a)芘标准使用液(0.1g/mL),点于同一条乙酰化滤纸上,按5.1.3.1展开,取出阴干.于暗室紫外灯下目测比较,找出相当于标准斑点荧光强度的样品浓缩液体积,如样品含量太高,可稀释后再重点,尽量使样品浓度在两个标准斑点之间.5.2.2计算式中：X2——样品中苯并(a)芘的含量,g/kg； m3——样品斑点相当苯并(a)芘的质量,g；V1——样品浓缩总体积,mL； V2——点样体积,mL； m2——样品质量,g.