食品中大肠菌群的测定程序
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/26 20:12:26
食品中大肠菌群的测定程序
食品中大肠菌群的测定程序
食品中大肠菌群的测定程序
大肠菌群测定
大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸(培养基原来的颜色是红色的,如果产酸会变成黄色)、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌.食品检出大肠菌群,则表示该食品曾受粪便污染.结果报告为每100ml（g）样品中大肠菌群的最近似数（MPN）
设备和材料：
1. 温箱：36±1度
2. 冰箱：0-4度
3. 恒温水浴：44.5±0.5度
4. 天平
5. 显微镜
6. 均质器或乳苯
7. 平皿：直径为90mm
8. 试管
9. 吸管
10. 广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml
11. 玻璃珠：直径为5mm左右
12. 酒精灯
13. 试管架
培养基和试剂：
1. 乳糖胆盐发酵管
2. 伊红美蓝琼脂平板
3. 乳糖发酵管
4. EC肉汤
5. 磷酸盐缓冲稀释液
6. 生理盐水
7. 革兰氏染色液
操作步骤：
7.1）.检样稀释
7.1.1 以无菌操作将检样25ml(或g)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释玻璃瓶内（瓶内予置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳苯内,经充分振摇或研磨作成1：10的均匀稀释液.固体检样最好用均质器,以8000-10000r/min 的速度处理min,作成1：10的均匀稀释液.
7.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混均,作成1：100的稀释液
7.1.3 另取1ml灭菌吸管,按上条操作依次做成10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1ml灭菌吸管.
7.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度接种3管.
7.2 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管.每一稀释度接种3管,置36±1度温箱内,培养24±2小时,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行.
7.3 分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1度温箱内,培养18-24小时,然后取出,观察菌落形态,并做革兰色染色和验实试验.
7.4 证实试验
在上述平板上,挑取可疑的大肠菌群1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1度温箱内培养24±2小时,观察产气情况凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无蚜苞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性.
7.5 报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每10ml(g)大肠菌群的mpn值.
8 粪大肠菌群
8.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物（见7.2条）转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2度水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面）,培养24±2小时,经培养后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性；如有产气者,则将所有产气的EC肉汤分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置36±1度培养18-24小时,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性.
8.2 结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100ml（g）粪大肠菌群的MPN值
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出.
本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草.
本标准主要起草人刘宏道.
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释.