pcr 引物特异性不好怎么办

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/15 14:35:43
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pcr 引物特异性不好怎么办
pcr 引物特异性不好怎么办

pcr 引物特异性不好怎么办
先blast一下,引物特异性不好再改变条件也没意义
引物GC% 5‘端或中间高3’低,3’端5个碱基内尽量不要有连在一起的CG且少于3个.
引物不要在串联重复区,比如Alu上
如果引物没有问题,可以减少引物浓度(100nM),酶的的用量(1U/50ul),增加模板和提高退火温度
退火温度最好在设计时统一,这样实验更方便,一般pp5上tm55度可以60度退火,上下游引物tm不要差的太多

提高退火温度

增加引物长度,提高退火温度。

最简单就是重新设计(个人感觉)
如果LZ只是用来扩增,也可以跟LS几位说的一样提高退火温度试试看,如果还要用来测序那么建议LZ还是重新设计个比较保险。

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