关于DNA电泳总体介绍,定义等.包括定义,常见问题等,求详细介绍.为什么正常人有两条，患病只有一条？
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/19 17:53:33
关于DNA电泳总体介绍,定义等.包括定义,常见问题等,求详细介绍.为什么正常人有两条，患病只有一条？
关于DNA电泳总体介绍,定义等.
包括定义,常见问题等,求详细介绍.
为什么正常人有两条，患病只有一条？
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DNA为碱性物质,在电泳（缓冲液pH=8）时带负电荷,在一定的电场力作用下向正极泳动.而DNA链上的负电荷伴随着DNA分子量的增加而增加,荷质比是一常数,故电泳中DNA的分离类似分子筛效应.电泳中影响DNA分子泳动的因素很多,主要分两方面：DNA分子特性和电泳条件.
⑴DNA分子大小 DNA分子越大在胶中的摩擦阻力就越大,泳动也越慢,迁移速率与线状DNA分子质量的对数值成反比.
⑵DNA分子构型 对于质粒DNA分子即使具有相同分子质量,因构型不同也会造成电泳时受到的阻力不同,最终造成泳动速率的不同.常规电泳中质粒DNA分子的3种构型泳动速率：超螺旋最快、线状分子次之,开环分子最慢.
⑶ 不同的胶浓度 对于同种DNA分子胶浓度越高,电泳速率越慢.不同胶浓度对于DNA片段呈线性关系有所区别,浓度较稀的胶线性范围较宽,而浓的胶对小分子DNA片段呈现较好的线性关系.所以常规实验中对于小片段DNA分子的分离采用高浓度的胶分离（有时甚至用2％的凝胶）,而对于分离大片段则用低浓度的凝胶.
⑷电场强度 电泳时为了尽快得到实验结果,所用的电场强度约为5V/cm,这样的场强下虽能得到结果,但分辨率不高.在精确测定 DNA分子大小时,应降低电压至1V/cm.电场强度偏高时电泳分离的线性范围会变窄,电压过高时也会由于电泳中产生的大量热量导致DNA片段的降解.实验中要根据需要选择合适电压,如对于DNA大片段的分离可适当选择较低电压进行（在Southern杂交中的DNA电泳）,避免托尾现象的产生；而对于小分子DNA,由于其在凝胶中的快速扩散会导致条带模糊,可选用相对较高的电泳以缩短电泳时间.
⑸溴化乙锭 简称EB,电泳中的染色剂,具有扁平结构,能嵌入到DNA碱基对间,对线状分子与开环分子影响较小而对超螺旋态的分子影响较大.当DNA分子中嵌入的EB分子逐渐增多时,原来为负超螺旋状态的分子开始向共价闭合环状转变,电泳迁移速度由快变慢；当嵌入的EB分子进一步增加时,DNA分子由共价闭合环状向正超螺旋状态转变,这时电泳迁移速率又由慢变快.这个临界点的游离EB质量浓度为0.1g/ml~0.5g/ml,即电泳时所加的浓度.因此一般电泳可以忽略此因素,而对于特殊电泳,消除此因素影响可采用电泳后染色.
⑹电泳缓冲液 目前有3种缓冲液适用于天然双链DNA的电泳：TAE、TBE和TPE,其组成及特点见表2.2.一般常用的DNA电泳选用TAE较多,其电泳时间较快,而且成本比较低,但是其缓冲容量较低,需经常更换电泳液.