为什么基因测序前将基因PCR克隆后还要放到大肠杆菌载体上再测序?除了防止PCR产物降解外还有别的原因吗?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/27 03:09:49
为什么基因测序前将基因PCR克隆后还要放到大肠杆菌载体上再测序?除了防止PCR产物降解外还有别的原因吗?
为什么基因测序前将基因PCR克隆后还要放到大肠杆菌载体上再测序?
除了防止PCR产物降解外还有别的原因吗?
为什么基因测序前将基因PCR克隆后还要放到大肠杆菌载体上再测序?除了防止PCR产物降解外还有别的原因吗?
一楼完全没说到重点,二楼正解.
你看过测序的结果就知道了,前面的几十个碱基是无法识别的杂峰,最后几百个碱基也是无法识别的杂峰,尽管结果中还是以单个碱基字母的形式给你写出来,但是那是0智商的机器自动记录的,你要人工剔除这部分序列,也就是说你不知道这部分序列的真实数据.
放到载体上就是为了把前面这几十个测序弄不出来的碱基放到质粒的部分,不清楚就不清楚,我们反正不需要知道,我们需要知道的序列完全落在后面清楚的部分就行了.
补充一个更重要和实际的考虑：实际测序中，可靠的测序结果往往是从引物后二三十个碱基才开始的。如果片段比较长，超过一次测序能力如七八百之外，即使双向测序也无法获得引物（排除非特异扩增）或紧邻引物处的序列时，就需要克隆到载体再测序。
另外，如果要做后续表达，也必须考虑到引物合成中不可避免的偶发错误，克隆到载体再测序可以清楚的检测。再者，还有比如引入酶切位点，正反向连接等特定实验要求的考虑。
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补充一个更重要和实际的考虑：实际测序中，可靠的测序结果往往是从引物后二三十个碱基才开始的。如果片段比较长，超过一次测序能力如七八百之外，即使双向测序也无法获得引物（排除非特异扩增）或紧邻引物处的序列时，就需要克隆到载体再测序。
另外，如果要做后续表达，也必须考虑到引物合成中不可避免的偶发错误，克隆到载体再测序可以清楚的检测。再者，还有比如引入酶切位点，正反向连接等特定实验要求的考虑。
其实我一般都是PCR后直接测序的，因为我多数的实验不做后续表达实验且序列已知。
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你说的应该是将PCR产物放到质粒上，这样做好处很多，第一，质粒的测序要更容易，而扩增的产物测序相对容易失败，第二，质粒的序列是已知的，你只需要给测序公司提供质粒的类型，他们就可以用自备的通用引物进行测序，而不需要你额外提供引物，而且你可以很多样品都用一个通用引物来测序，只要他们都是放到同一类型的质粒载体上就行，节约不少精力、经费哦。...
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你说的应该是将PCR产物放到质粒上，这样做好处很多，第一，质粒的测序要更容易，而扩增的产物测序相对容易失败，第二，质粒的序列是已知的，你只需要给测序公司提供质粒的类型，他们就可以用自备的通用引物进行测序，而不需要你额外提供引物，而且你可以很多样品都用一个通用引物来测序，只要他们都是放到同一类型的质粒载体上就行，节约不少精力、经费哦。
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